| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-19页 |
| 1.蝎、蝎毒素的概述 | 第12页 |
| 2.蝎毒素分类 | 第12-13页 |
| 3.蝎毒素神经生物学 | 第13-14页 |
| 4.蝎毒素空间结构与功能分析 | 第14-15页 |
| 5.东亚钳蝎镇痛活性研究 | 第15-17页 |
| 6.重组蝎毒素基因的表达 | 第17-18页 |
| 7.应用前景及立题思路 | 第18-19页 |
| 第一章 东亚钳蝎镇痛肽Ⅳ表达载体的构建 | 第19-35页 |
| 1.实验材料 | 第19页 |
| 2.实验方法 | 第19-26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第19页 |
| ·质粒小量制备(碱裂解法) | 第19-20页 |
| ·热转化大肠杆菌感受态细胞 | 第20页 |
| ·不连续-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第20-21页 |
| ·重组质粒pET-28a-N-Tag_((His))-SAP Ⅳ的构建 | 第21-24页 |
| ·SAP Ⅳ的PCR扩增 | 第22页 |
| ·SAP Ⅳ的双酶切 | 第22页 |
| ·表达载体pET-28a(+)双酶切 | 第22-23页 |
| ·连接和转化 | 第23页 |
| ·含重组质粒的细菌菌落的鉴定 | 第23页 |
| ·重组质粒pET-28a-N-Tag_((His))-SAP Ⅳ诱导表达 | 第23-24页 |
| ·重组质粒pNJUTRX-SAP Ⅳ、pNJUTRX-SAP Ⅳ-1、pNJUTRX-SAP Ⅳ-2的构建 | 第24-26页 |
| ·SAP Ⅳ的PCR扩增 | 第25页 |
| ·SAP Ⅳ的双酶切 | 第25-26页 |
| ·表达载体pNJUTRX-1双酶切 | 第26页 |
| ·连接和转化 | 第26页 |
| ·含重组质粒的细菌菌落的鉴定 | 第26页 |
| ·重组质粒pNJUTRX-SAP Ⅳ、pNJUTRX-SAP Ⅳ-1、pNJUTRX-SAP Ⅳ-2的诱导表达 | 第26页 |
| 3.实验结果 | 第26-33页 |
| ·重组质粒pET-28a-N-Tag_((His))-SAP Ⅳ的构建 | 第26-28页 |
| ·SAP Ⅳ的PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·表达载体pET-28a(+)双酶切 | 第28页 |
| ·含重组质粒的细菌菌落的鉴定 | 第28页 |
| ·重组质粒pET-28a-N-Tag_((His))-SAP Ⅳ的诱导表达 | 第28-29页 |
| ·重组质粒pNJUTRX-SAP Ⅳ、pNJUTRX-SAP Ⅳ-1、pNJUTRX-SAP Ⅳ-2的构建 | 第29-32页 |
| ·SAPⅣ的PCR扩增 | 第30页 |
| ·表达载体pNJUTRX-1的双酶切 | 第30-31页 |
| ·含重组质粒的细菌菌落的鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组质粒pNJUTRX-SAPⅣ、pNJUTRX-SAPⅣ-1、pNJUTRX-SAPⅣ-2的诱导表达 | 第32-33页 |
| 4.小结 | 第33-34页 |
| 5.讨论 | 第34-35页 |
| 第二章 东亚钳蝎镇痛肽Ⅳ表达产物的纯化及活性测定 | 第35-49页 |
| 1.实验材料 | 第35页 |
| 2.实验方法 | 第35-37页 |
| ·热转化大肠杆菌感受态细胞 | 第35页 |
| ·重组镇痛活性肽Ⅳ实验室规模发酵 | 第35-36页 |
| ·Chelating Sepharose Fast Flow柱层析 | 第36页 |
| ·SP-Sepharose Fast Flow柱层析 | 第36页 |
| ·三氯醋酸法沉淀蛋白 | 第36页 |
| ·不连续-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第36-37页 |
| ·蛋白质含量测定——Lowry法(即Folin-酚法) | 第37页 |
| ·小鼠醋酸扭体法测定重组多肽SAPⅣ的镇痛活性 | 第37页 |
| 3.实验结果 | 第37-47页 |
| ·表达产物纯化部分 | 第37-45页 |
| ·表达产物SAPⅣ-C-Tag_((His))的纯化结果 | 第37-39页 |
| ·表达产物N-Tag_((His))-SAPⅣ的纯化结果 | 第39-41页 |
| ·表达产物N-Tag_((His))-SAPⅣ-1的纯化结果 | 第41-43页 |
| ·表达产物N-Tag_((His))-SAPⅣ-2的纯化结果 | 第43-45页 |
| ·镇痛活性测定部分 | 第45-47页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第45-46页 |
| ·醋酸扭体法测定重组蛋白SAPⅣ的镇痛活性 | 第46-47页 |
| 4.小结 | 第47页 |
| 5.讨论 | 第47-49页 |
| 全文结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 发表文章 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
