| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-16页 |
| ·手性化合物概述 | 第8页 |
| ·手性化合物 | 第8页 |
| ·手性化合物的制备 | 第8页 |
| ·麻黄碱概述 | 第8-10页 |
| ·麻黄碱简介 | 第9页 |
| ·麻黄碱的应用 | 第9页 |
| ·麻黄碱的生产方法与研究现状 | 第9-10页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统 | 第10-13页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统的特点 | 第10-11页 |
| ·羰基还原酶基因mldh 在枯草芽孢杆菌中的密码子偏好性分析 | 第11页 |
| ·枯草芽孢杆菌整合表达 | 第11-13页 |
| ·研究思路及研究内容 | 第13-16页 |
| ·已有研究基础 | 第13页 |
| ·研究思路及研究意义 | 第13-14页 |
| ·研究内容 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-28页 |
| ·材料 | 第16-18页 |
| ·菌株与质粒 | 第16-17页 |
| ·主要生化和分子生物学试剂 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·需配试剂溶液 | 第17-18页 |
| ·主要设备和仪器 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-28页 |
| ·Bacillus subtilis W6600 染色体DNA 的提取 | 第18页 |
| ·常规分子生物学基因操作 | 第18页 |
| ·基因的PCR 扩增 | 第18页 |
| ·游离表达载体pHY300plk-PrpsD-mldh-TrpsD 的构建 | 第18-19页 |
| ·整合表达载体pUC19-5E-pmt-loxpkan-3E 的构建 | 第19-22页 |
| ·表达载体pHY300plk-PxylR-cre-trpsD 的构建 | 第22页 |
| ·枯草芽孢杆菌化学感受态制备及转化 | 第22-23页 |
| ·细胞裂解液的制备 | 第23-24页 |
| ·SDS-PAGE 检测 | 第24页 |
| ·重组菌生物转化反应及检测 | 第24页 |
| ·游离表达菌株B. subtilis W6600 (pHY300plk-PrpsD-mldh-TrpsD)的构建 | 第24页 |
| ·游离表达菌株B. subtilis W6600 (pHY300plk-PrpsD-mldh-TrpsD)全细胞不对称还原反应 | 第24-25页 |
| ·整合表达菌株B. subtilis W6600 (5E-pmt-loxpkan-3E)的构建 | 第25页 |
| ·枯草芽孢杆菌cre-loxp 系统的构建及整合表达菌株抗性基因的敲除 | 第25-27页 |
| ·整合型菌株B. subtilis W6600 (5E-pmt-loxp-3E)全细胞不对称还原反应 | 第27页 |
| ·游离表达菌株与整合型菌株的比较 | 第27-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-44页 |
| ·游离表达菌株B. subtilis W6600 (pHY300plk-PrpsD-mldh-TrpsD)的构建及其全细胞不对称还原反应 | 第28-33页 |
| ·载体pHY300plk-PrpsD-TrpsD 的构建 | 第28页 |
| ·游离表达载体pHY300plk-PrpsD-mldh-TrpsD 的构建 | 第28-29页 |
| ·游离表达菌株B. subtilis W6600 (pHY300plk-PrpsD-mldh-TrpsD)的鉴定 | 第29-31页 |
| ·游离表达菌株B. subtilis W6600 (pHY300plk-PrpsD-mldh-TrpsD)全细胞不对称还原反应 | 第31-33页 |
| ·整合表达菌株B. subtilis W6600 (5E-pmt-loxpkan-3E)的构建 | 第33-37页 |
| ·载体pUC19-5E 的构建 | 第33-34页 |
| ·载体pUC19-5E-3E 的构建 | 第34页 |
| ·载体pUC19-5E-pmt-3E 的构建 | 第34-35页 |
| ·整合表达载体pUC19-5E-pmt-loxpkan-3E 的构建 | 第35页 |
| ·整合表达菌株B. subtilis W6600 (5E-pmt-loxpkan-3E)的鉴定 | 第35-37页 |
| ·枯草芽孢杆菌cre-loxp 系统的构建及整合表达菌株抗性基因的敲除 | 第37-40页 |
| ·载体pHY300plk-PxylR 的构建 | 第37-38页 |
| ·表达载体pHY300plk-PxylR-cre-trpsD 的构建 | 第38页 |
| ·枯草芽孢杆菌cre-loxp 系统的构建 | 第38页 |
| ·整合表达菌株抗性基因的敲除 | 第38-39页 |
| ·质粒pHY300plk-PxylR-cre-trpsD 的丢失 | 第39-40页 |
| ·整合型菌株B. subtilis W6600 (5E-pmt-loxp-3E)全细胞不对称还原反应 | 第40-41页 |
| ·葡萄糖浓度对整合型重组枯草芽孢杆菌全细胞生物转化的影响 | 第40-41页 |
| ·底物MAK 浓度对整合型重组枯草芽孢杆菌全细胞生物转化的影响 | 第41页 |
| ·游离表达菌株与整合型菌株的比较 | 第41-44页 |
| ·生长曲线的测定 | 第41-42页 |
| ·细胞回用次数的考察 | 第42页 |
| ·转化过程中辅酶问题的考察 | 第42-44页 |
| 主要结论与展望 | 第44-46页 |
| 致谢 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 附录 | 第52-53页 |
