| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-44页 |
| 第一节 禽流感的研究进展 | 第17-35页 |
| 1. 禽流感的流行 | 第17-21页 |
| ·禽流感的发现 | 第17-18页 |
| ·禽流感的历史 | 第18-19页 |
| ·禽流感的传播 | 第19页 |
| ·从禽流感到人流感 | 第19-21页 |
| 2. 禽流感病毒分子生物学特征 | 第21-32页 |
| ·病毒分类 | 第21-22页 |
| ·病毒结构 | 第22页 |
| ·病毒的分子生物学特性 | 第22-32页 |
| ·基因结构 | 第22-24页 |
| ·病毒蛋白 | 第24-27页 |
| ·病毒蛋白抗原性 | 第27-32页 |
| 3. 禽流感病毒的宿主特异性 | 第32-33页 |
| 4. 禽流感病毒抗原变异性 | 第33-35页 |
| 第二节 禽流感疫苗的研究进展 | 第35-43页 |
| 1. 禽流感全病毒灭活疫苗 | 第35-37页 |
| 2. 基因工程亚单位疫苗 | 第37-38页 |
| 3. 核酸疫苗 | 第38-39页 |
| 4. 活疫苗 | 第39-41页 |
| ·活载体疫苗 | 第39-40页 |
| ·冷适应流感弱毒疫苗 | 第40页 |
| ·复制缺陷型流感病毒疫苗 | 第40-41页 |
| 5 表位疫苗 | 第41-43页 |
| 第三节 本研究的内容和意义 | 第43-44页 |
| 第二章 禽流感病毒抗原表位分析及禽流感病毒H5N1亚型基因工程疫苗设计 | 第44-55页 |
| ·引言 | 第44-45页 |
| ·材料方法 | 第45-46页 |
| ·主要应用软件和网站工具 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-46页 |
| ·国内流行H5N1毒株的HA和NP蛋白序列的选择 | 第45页 |
| ·MHC II细胞表位分析 | 第45页 |
| ·CTL表位的分析和选择 | 第45页 |
| ·禽流感病毒H5N1亚型基因工程疫苗蛋白结构设计 | 第45-46页 |
| ·禽流感病毒H5N1亚型基因工程疫苗蛋白编码基因设计 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-53页 |
| ·国内流行H5N1毒株的HA和NP蛋白序列的选择 | 第46-50页 |
| ·HA1蛋白的MHC II表位分析结果 | 第50页 |
| ·NP蛋白的CTL表位的分析和选择 | 第50-51页 |
| ·禽流感病毒H5N1亚型基因工程疫苗蛋白结构设计 | 第51-52页 |
| ·禽流感病毒H5N1亚型基因工程疫苗蛋白编码基因设计 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 第三章 禽流感病毒H5N1亚型基因工程疫苗在大肠杆菌中的表达 | 第55-69页 |
| ·引言 | 第55页 |
| ·材料和方法 | 第55-60页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·主要仪器 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-60页 |
| ·禽流感病毒H5N1亚型基因工程疫苗基因片段获取 | 第56页 |
| ·载体及疫苗基因片段的限制性内切酶消化 | 第56-57页 |
| ·DNA片段回收 | 第57页 |
| ·产物连接 | 第57-58页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态的制备 | 第58页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第58页 |
| ·质粒提取 | 第58-59页 |
| ·酶切鉴定 | 第59页 |
| ·DNA 序列测定 | 第59页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第59页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第59页 |
| ·禽流感病毒 H5N1 亚型基因工程疫苗表达量分析 | 第59-60页 |
| ·禽流感病毒 H5N1 亚型基因工程疫苗表达形式分析 | 第60页 |
| ·结果 | 第60-64页 |
| ·目的基因片段的合成 | 第60-61页 |
| ·禽流感病毒 H5N1 亚型基因工程疫苗原核表达载体的构建 | 第61-63页 |
| ·pRSET-AIV 序列测定 | 第63页 |
| ·禽流感病毒 H5N1 亚型基因工程疫苗诱导表达 | 第63-64页 |
| ·禽流感病毒 H5N1 亚型基因工程疫苗表达形式 | 第64页 |
| ·讨论 | 第64-69页 |
| 第四章 重组禽流感病毒H5N1亚型基因工程疫苗中试工艺探索 | 第69-89页 |
| ·引言 | 第69页 |
| ·材料和方法 | 第69-76页 |
| ·材料 | 第69-70页 |
| ·菌株 | 第69-70页 |
| ·试剂 | 第70页 |
| ·主要仪器设备 | 第70页 |
| ·方法 | 第70-76页 |
| ·菌种稳定性检测 | 第70-71页 |
| ·禽流感病毒H5N1亚型基因工程疫苗工程菌发酵条件探索 | 第71-72页 |
| ·培养基酸碱度优化 | 第71页 |
| ·诱导时长优化 | 第71页 |
| ·培养基中碳源浓度优化 | 第71-72页 |
| ·工程菌发酵培养基筛选 | 第72页 |
| ·禽流感病毒H5N1亚型基因工程疫苗工程菌高密度发酵 | 第72-73页 |
| ·禽流感病毒H5N1亚型基因工程疫苗工程菌活化 | 第72页 |
| ·禽流感病毒H5N1亚型基因工程疫苗种子菌制备 | 第72页 |
| ·溶氧反馈-分批补料高密度发酵禽流感病毒H5N1亚型基因工程疫苗工程菌 | 第72-73页 |
| ·菌体收获及表达检测 | 第73页 |
| ·禽流感病毒H5N1亚型基因工程疫苗纯化 | 第73-75页 |
| ·菌体裂解及粗纯 | 第73-74页 |
| ·精细纯化 | 第74页 |
| ·抗原纯度检测 | 第74-75页 |
| ·抗原复性 | 第75-76页 |
| ·蛋白含量测定 | 第75页 |
| ·稀释复性 | 第75页 |
| ·超滤浓缩 | 第75页 |
| ·抗原含量测定 | 第75-76页 |
| ·结果 | 第76-85页 |
| ·菌种稳定性 | 第76-77页 |
| ·禽流感病毒 H5N1 亚型基因工程疫苗工程菌发酵条件优化 | 第77-82页 |
| ·培养基 pH 对工程菌生长的影响 | 第77-78页 |
| ·培养基 pH 对疫苗蛋白表达的影响 | 第78-79页 |
| ·诱导时长对疫苗蛋白表达的影响 | 第79-80页 |
| ·培养基中甘油浓度对工程菌生长及目的蛋白表达的影响 | 第80-81页 |
| ·不同培养基配方对工程菌生长及目的蛋白表达的影响 | 第81-82页 |
| ·禽流感病毒 H5N1 亚型基因工程疫苗工程菌高密度发酵 | 第82-83页 |
| ·禽流感病毒 H5N1 亚型基因工程疫苗纯化 | 第83-85页 |
| ·复性及含量测定 | 第85页 |
| ·讨论 | 第85-89页 |
| 第五章 禽流感病毒 H5N1 亚型基因工程疫苗的免疫效力研究 | 第89-105页 |
| ·引言 | 第89-90页 |
| ·材料及设备 | 第90-92页 |
| ·材料 | 第90-91页 |
| ·试验动物 | 第90页 |
| ·疫苗、佐剂及病毒 | 第90页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第90-91页 |
| ·主要设备 | 第91-92页 |
| ·方法与结果 | 第92-102页 |
| ·ELISA方法检测禽流感H5N1亚型基因工程疫苗抗原与禽流感H5（Re-4株）、H5（Re-5 株）、H7、H9 型血凝抑制试验血清的特异性反应 | 第92-94页 |
| ·溶液的配制 | 第92页 |
| ·方法 | 第92-93页 |
| ·结果 | 第93-94页 |
| ·原始数据 | 第93-94页 |
| ·结果判定 | 第94页 |
| ·结果分析 | 第94页 |
| ·禽流感 H5N1 亚型基因工程疫苗免疫小白鼠试验 | 第94-97页 |
| ·疫苗制备 | 第94页 |
| ·方法 | 第94-95页 |
| ·小鼠抗体检测 | 第95页 |
| ·小鼠细胞因子检测 | 第95页 |
| ·结果 | 第95-97页 |
| ·血清中的 IgA 抗体 | 第95-96页 |
| ·血清中的 IgG 抗体 | 第96页 |
| ·禽流感病毒 H5N1 亚型基因工程疫苗诱导的细胞因子反应 | 第96-97页 |
| ·禽流感 H5N1 亚型基因工程疫苗用三种商业化佐剂免疫反应的比较 | 第97-99页 |
| ·疫苗乳剂的制备 | 第97-98页 |
| ·用 ISA 50V2 佐剂乳化 | 第97-98页 |
| ·用 MONTANIDETMISA 61VG 佐剂乳化 | 第98页 |
| ·用 ISA 206VG 佐剂乳化 | 第98页 |
| ·方法 | 第98页 |
| ·结果 | 第98-99页 |
| ·用不同剂量的 H5N1 亚型基因工程疫苗免疫 SPF 鸡，ELISA 法检测其抗体水平，得出最佳免疫剂量及 HI 方法与 ELISA 方法在评价抗体水平方面的关联性 | 第99-102页 |
| ·方法 | 第99-100页 |
| ·ELISA 法检测其抗体水平 | 第100页 |
| ·血凝抑制试验 | 第100页 |
| ·结果 | 第100-102页 |
| ·酶联免疫吸附法（ELISA）检测待检血清 | 第100-101页 |
| ·血凝抑制 HI 抗体效价测定 | 第101页 |
| ·HI 方法与 ELISA 方法在评价抗体水平方面的关联 | 第101-102页 |
| ·讨论 | 第102-103页 |
| ·展望 | 第103-105页 |
| 全文总结 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-114页 |
| 附录 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 个人简历 | 第116-117页 |
| 发表的学术论文 | 第117页 |
