| 中文摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-32页 |
| ·细胞因子概述 | 第14页 |
| ·白细胞介素 18 的研究进展 | 第14-20页 |
| ·IL-18 基因结构及组织分布 | 第14-16页 |
| ·IL-18 的表达 | 第16-17页 |
| ·IL-18 的受体与信号转导 | 第17-18页 |
| ·IL-18 与机体防御 | 第18-20页 |
| ·鸡白细胞介素 18 的研究进展 | 第20-25页 |
| ·鸡白细胞介素 18 的分子生物学特性 | 第20-22页 |
| ·鸡白细胞介素 18 与临床疾病 | 第22-24页 |
| ·ChIL-18 的应用前景 | 第24-25页 |
| ·单克隆抗体 | 第25-29页 |
| ·单抗技术的基本原理 | 第26页 |
| ·单克隆抗体的特点 | 第26页 |
| ·单克隆抗体技术的应用 | 第26-29页 |
| ·动物细胞因子单克隆抗体及应用 | 第29-30页 |
| ·本课题研究的内容、目的及意义 | 第30-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-67页 |
| ·材料 | 第32-39页 |
| ·实验动物 | 第32页 |
| ·所用试剂及耗材 | 第32页 |
| ·质粒、细胞及受体菌培养基 | 第32-35页 |
| ·主要试剂的配制 | 第35-39页 |
| ·主要仪器及设备 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-67页 |
| ·鸡 IL-18 成熟蛋白基因原核表达载体的构建 | 第39-43页 |
| ·重组质粒 pET-28a-mChIL-18 的鉴定 | 第43-45页 |
| ·重组质粒 pET-28a-mChIL-18 的诱导表达 | 第45-48页 |
| ·Western blot 检测 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白 rChIL-18 的大量表达及纯化 | 第49-51页 |
| ·重组蛋白 rChIL-18 对 BALB/c 小鼠的免疫 | 第51-52页 |
| ·mChIL-18 抗体间接 ELISA 检测方法的建立 | 第52-55页 |
| ·细胞融合 | 第55-58页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化及冻存 | 第58-59页 |
| ·单克隆抗体腹水的制备 | 第59-60页 |
| ·单克隆抗体特性的鉴定 | 第60-61页 |
| ·Western-blot 的鉴定 | 第61页 |
| ·特异性试验 | 第61页 |
| ·间接免疫荧光鉴定 | 第61-64页 |
| ·ELISA 叠加试验初步检测单抗的抗原识别位点 | 第64-67页 |
| 3 结果 | 第67-81页 |
| ·重组质粒的 PCR、双酶切及测序鉴定 | 第67-69页 |
| ·重组质粒 pET-28a-mChIL18 在 E.coli Rosetta(DE3)中的表达及纯化 | 第69-73页 |
| ·诱导表达 | 第69-70页 |
| ·诱导条件的优化 | 第70-71页 |
| ·重组蛋白的 western-blot 分析 | 第71-72页 |
| ·重组蛋白的大量表达及纯化 | 第72-73页 |
| ·间接 ELISA 方法最佳反应条件的确定 | 第73-77页 |
| ·抗原包被浓度与血清最佳稀释度的选择 | 第73页 |
| ·包被液的选择 | 第73-74页 |
| ·包被温度的优化 | 第74页 |
| ·封闭液的选择 | 第74页 |
| ·最佳封闭时间的选择 | 第74-75页 |
| ·血清最佳反应时间的确定 | 第75页 |
| ·酶标二抗稀释度的选择 | 第75-76页 |
| ·酶标二抗最佳作用时间的选择 | 第76页 |
| ·最佳反应时间 | 第76页 |
| ·阴性阳性血清判定标准的确定 | 第76页 |
| ·ELISA 重复性试验 | 第76-77页 |
| ·血清样品的检测 | 第77页 |
| ·细胞融合及杂交瘤细胞的筛选 | 第77页 |
| ·杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性鉴定 | 第77页 |
| ·单抗特性的鉴定 | 第77-81页 |
| ·Ig 亚类的鉴定 | 第77-78页 |
| ·杂交瘤细胞的特异性鉴定 | 第78页 |
| ·Western-blot 分析 | 第78页 |
| ·杂交瘤细胞株的获得 | 第78-79页 |
| ·McAb 的亚类及腹水效价检测结果 | 第79页 |
| ·间接免疫荧光鉴定 | 第79-80页 |
| ·单克隆抗体的位点分析 | 第80-81页 |
| 4 讨论 | 第81-86页 |
| ·鸡白细胞介素 18 成熟蛋白的表达与纯化 | 第81-82页 |
| ·mChIL-18 抗体间接 ELISA 方法的建立及应用 | 第82页 |
| ·单克隆抗体的制备与鉴定 | 第82-86页 |
| ·小鼠免疫 | 第82-83页 |
| ·细胞融合 | 第83-84页 |
| ·阳性克隆的筛选及单抗特性检测 | 第84-86页 |
| 结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第98页 |
