| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩写词 | 第12-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-26页 |
| 1 研究背景 | 第15-16页 |
| 2 文献综述 | 第16-24页 |
| ·植物开花转变分子机理的研究进展 | 第16-19页 |
| ·开花转变的定义 | 第16页 |
| ·开花转变的几种假说 | 第16-17页 |
| ·成花决定有关基因 | 第17-19页 |
| ·花分生组织特征基因 | 第17-18页 |
| ·分生组织相关基因在成花决定中的相互关系 | 第18-19页 |
| ·龙眼花芽分化的研究 | 第19-20页 |
| ·龙眼的花芽分化形态变化研究 | 第19页 |
| ·龙眼花芽分化的主要影响因子 | 第19-20页 |
| ·外界因素对龙眼成花的影响 | 第19-20页 |
| ·营养条件和激素水平影响龙眼花芽形成 | 第20页 |
| ·差异表达基因的分离方法 | 第20-23页 |
| ·m RNA 差异显示技术 | 第20-21页 |
| ·cDNA 代表性差异分析 | 第21页 |
| ·抑制消减杂交 | 第21-22页 |
| ·基因表达系列分析法 | 第22页 |
| ·cDNA 微列阵 | 第22-23页 |
| ·cDNA-AFLP 技术在植物差异表达研究中的应用 | 第23-24页 |
| ·cDNA-AFLP 技术的基本原理与试验流程 | 第23页 |
| ·cDNA-AFLP 技术阳性率分析 | 第23页 |
| ·cDNA-AFLP 技术在植物生理生化变化方面的研究趋势 | 第23-24页 |
| 3 本试验的目的与意义 | 第24-25页 |
| 4 试验技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 ‘四季蜜’龙眼总RNA 提取和cDNA-AFLP 体系的建立 | 第26-53页 |
| 1 材料与方法 | 第26-39页 |
| ·试验材料的获得 | 第26页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第26-27页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器与耗材 | 第26-27页 |
| ·试验流程 | 第27-39页 |
| ·龙眼总RNA 获得与纯度检测 | 第27-29页 |
| ·建立RNA 提取环境 | 第27页 |
| ·总RNA 的提取方法 | 第27-29页 |
| ·改良SDS 法 | 第27-28页 |
| ·改良CTAB 法 | 第28-29页 |
| ·RNA 检测 | 第29页 |
| ·琼脂糖电泳法检测总RNA 的完整性和纯度、 | 第29页 |
| ·分光光度计直接检测浓度和纯度 | 第29页 |
| ·cDNA 的合成 | 第29-37页 |
| ·RNA 纯化 | 第29-30页 |
| ·逆转录cDNA 第一链 | 第30页 |
| ·cDNA 第二链的合成 | 第30-31页 |
| ·cDNA 双链的纯化 | 第31页 |
| ·酶切双链cDNA | 第31-32页 |
| ·制备接头 | 第32页 |
| ·接头与酶切产物的连接 | 第32-33页 |
| ·连接产物的预扩增 | 第33-34页 |
| ·预扩增产物最优稀释倍数的建立 | 第34页 |
| ·选择性扩增体系的调整 | 第34-35页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳试验程序 | 第35-36页 |
| ·银染流程 | 第36-37页 |
| ·特异表达基因片段的获得 | 第37-39页 |
| ·差异片段的回收 | 第37页 |
| ·差异片段的PCR 扩增 | 第37页 |
| ·PCR 产物的精制 | 第37页 |
| ·特异基因片段的测序 | 第37-39页 |
| ·PCR 产物与T 载体的连接 | 第37页 |
| ·制备感受态细胞 | 第37-38页 |
| ·转化及鉴定 | 第38-39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-50页 |
| ·RNA 提取体系的建立 | 第39-40页 |
| ·不同方法对总RNA 提取效果的影响 | 第39页 |
| ·改良SDS 法的优化 | 第39-40页 |
| ·LiCl 沉淀时间对提取RNA 效果的影响 | 第40页 |
| ·龙眼花芽和叶芽cDNA 的合成 | 第40-42页 |
| ·总RNA 的纯化 | 第40-41页 |
| ·双链cDNA 的合成 | 第41-42页 |
| ·cDNA-AFLP 技术体系的优化 | 第42-45页 |
| ·双酶切的最优酶用量 | 第42页 |
| ·预扩增产物稀释倍数的选择 | 第42-43页 |
| ·选择性扩增参数的优化 | 第43-45页 |
| ·Mg~(2+)浓度的确定 | 第43-44页 |
| ·dNTP 浓度的确定 | 第44-45页 |
| ·特异基因片段的第二次扩增 | 第45-46页 |
| ·差异片段的选择 | 第45页 |
| ·差异条带的PCR 扩增 | 第45-46页 |
| ·特异片段序列对比数据库 | 第46页 |
| ·特异片段序列同源性分析与统计结果 | 第46-50页 |
| 3 讨论 | 第50-53页 |
| ·植物组织总RNA 的提取 | 第50-51页 |
| ·cDNA-AFLP 分析技术的优化 | 第51-52页 |
| ·选择性扩增注意事项 | 第51页 |
| ·变性聚丙烯酰胺凝胶电泳常见问题 | 第51-52页 |
| ·分离差异片段代表的生物学意义 | 第52-53页 |
| 第三章 利用 RT-PCR 技术分离 SAM 3′端序列 | 第53-59页 |
| 1 材料与方法 | 第53-54页 |
| ·植物材料 | 第53页 |
| ·所用仪器与设备 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53-54页 |
| ·试验耗材与用具 | 第54页 |
| ·设计引物的合成及菌液的测序 | 第54页 |
| 2 花芽总 RNA 的提取及纯化 | 第54-56页 |
| ·花芽总 RNA 的提取 | 第54页 |
| ·花芽总 RNA 的纯化 | 第54页 |
| ·花芽 RNA 含量及浓度测定 | 第54页 |
| ·3′-RACE-Ready cDNA 的合成 | 第54-55页 |
| ·SAM 基因 3′端获得程序 | 第55-56页 |
| ·目的片段的 PCR 产物回收 | 第56页 |
| ·目的片段与 pMD18-T 载体连接、转化及鉴定 | 第56页 |
| 3 结果和分析 | 第56-57页 |
| ·龙眼 SAM 基因 cDNA 3’端的获得 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
