| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-29页 |
| ·奶牛品种及特征 | 第13-15页 |
| ·荷斯坦牛 | 第13页 |
| ·娟姗牛 | 第13-14页 |
| ·更赛牛 | 第14页 |
| ·爱尔夏牛 | 第14页 |
| ·瑞士褐牛 | 第14-15页 |
| ·奶牛的乳腺发育 | 第15-18页 |
| ·胚胎期奶牛乳腺发育 | 第15-16页 |
| ·青春期奶牛乳腺发育 | 第16-17页 |
| ·妊娠期奶牛乳腺发育 | 第17页 |
| ·泌乳期奶牛乳腺发育 | 第17页 |
| ·奶牛乳腺的退化 | 第17-18页 |
| ·奶牛生理周期的划分 | 第18页 |
| ·牛基因组学研究进展 | 第18-21页 |
| ·牛基因组遗传图谱 | 第19页 |
| ·牛基因组物理图谱 | 第19-20页 |
| ·牛基因组DNA的序列测定 | 第20页 |
| ·牛功能基因组学 | 第20-21页 |
| ·差异表达基因的筛选 | 第21-23页 |
| ·mRNA差异显示PCR | 第21-22页 |
| ·抑制性消减杂交技术 | 第22页 |
| ·基因表达连续性分析技术 | 第22页 |
| ·基因芯片 | 第22-23页 |
| ·基因芯片数据分析 | 第23-24页 |
| ·基因结构及功能分析 | 第24-26页 |
| ·获得全长cDNA的方法 | 第24-25页 |
| ·RNA干扰 | 第25-26页 |
| ·基因过表达技术 | 第26页 |
| ·乳腺细胞培养技术 | 第26-27页 |
| ·研究的目的和意义 | 第27-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-55页 |
| ·实验动物的选取 | 第29页 |
| ·用于RNA提取的乳腺组织获取 | 第29页 |
| ·用于细胞培养的乳腺组织获取 | 第29页 |
| ·奶牛乳腺组织总RNA提取 | 第29-31页 |
| ·RNA提取所用试剂、设备 | 第29-30页 |
| ·RNA提取步骤 | 第30页 |
| ·RNA质量检测 | 第30-31页 |
| ·基因芯片试验 | 第31-35页 |
| ·实验材料 | 第31-32页 |
| ·实验步骤 | 第32-35页 |
| ·基因芯片数据分析 | 第35页 |
| ·数据标准化 | 第35页 |
| ·基因差异表达分析 | 第35页 |
| ·Gene Ontology(GO) | 第35页 |
| ·信号通路 | 第35页 |
| ·荧光定量RT-PCR | 第35-39页 |
| ·基因选取及引物设计 | 第35-37页 |
| ·反转录生成cDNA | 第37页 |
| ·Real Time PCR反应 | 第37-38页 |
| ·引物效果验证 | 第38-39页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞培养 | 第39-42页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·实验设备 | 第39页 |
| ·主要实验试剂配制 | 第39-40页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞原代培养步骤 | 第40-41页 |
| ·乳腺上皮细胞鉴定 | 第41-42页 |
| ·Kcnmal、Ihh基因过表达检验基因功能 | 第42-51页 |
| ·Kcnmal、Ihh基因引物设计 | 第42页 |
| ·Kcnmal、Ihh基因PCR扩增 | 第42-43页 |
| ·克隆载体构建 | 第43-44页 |
| ·真核表达载体构建 | 第44-46页 |
| ·重组质粒载体转染奶牛乳腺上皮细胞 | 第46-47页 |
| ·基因过表达乳腺上皮细胞乳蛋白合成及细胞增殖检测 | 第47-51页 |
| ·Kcnmal、Ihh基因沉默检验基因功能 | 第51-55页 |
| ·Kcnmal、Ihh基因RNA干扰试验 | 第51-53页 |
| ·Western Blot检测Kcnmal、Ihh基因沉默对酪蛋白合成的影响 | 第53-54页 |
| ·流式细胞术检测Kcnmal基因和Ihh基因沉默对乳腺细胞增殖的影响 | 第54-55页 |
| 3 结果 | 第55-87页 |
| ·奶牛乳腺组织RNA提取质量检验结果 | 第55-56页 |
| ·基因芯片检测结果 | 第56-70页 |
| ·差异表达基因 | 第57-65页 |
| ·基因本体论 | 第65-68页 |
| ·信号通路 | 第68-70页 |
| ·荧光定量RT-PCR结果 | 第70-76页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞培养 | 第76-78页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞分离培养 | 第76-77页 |
| ·乳腺上皮细胞鉴定 | 第77-78页 |
| ·Kcnmal、Ihh基因功能检测 | 第78-87页 |
| ·Kcnmal、Ihh基因过表达试验结果 | 第78-83页 |
| ·Kcnmal、Ihh基因RNA干扰检测结果 | 第83-87页 |
| 4 讨论 | 第87-93页 |
| ·泌乳期奶牛乳腺基因表达谱 | 第87-88页 |
| ·Gene Ontology | 第88-89页 |
| ·荧光定量RT-PCR | 第89-90页 |
| ·Kcnmal、Ihh基因功能研究 | 第90-93页 |
| ·Kcnmal基因功能检测 | 第90-91页 |
| ·Ihh基因功能检测 | 第91-93页 |
| 5 结论 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-102页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第102页 |