中文摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-13页 |
縮写词简表 | 第13-15页 |
第一章 前言 | 第15-20页 |
技术路线 | 第19-20页 |
第二章 材料与方法 | 第20-46页 |
1 材料 | 第20-27页 |
·细胞系 | 第20页 |
·临床组织样本 | 第20-21页 |
·实验动物 | 第21页 |
·菌株和质粒载体 | 第21页 |
·试剂 | 第21-23页 |
·引物 | 第23-26页 |
·主要仪器 | 第26-27页 |
2 方法 | 第27-46页 |
·miRNA芯片检测 | 第27-28页 |
·实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第28-32页 |
·蛋白抽提 | 第32-33页 |
·组织样本采集 | 第33-34页 |
·miRNA及si-RNA转染目的细胞 | 第34-35页 |
·MTT | 第35页 |
·流式细胞分析细胞周期改变 | 第35页 |
·免疫组化检测 | 第35-36页 |
·原位杂交检测miRNA的表达 | 第36-37页 |
·免疫组化和原位杂交结果分析 | 第37页 |
·差异miRNA生物信息学分析 | 第37-41页 |
·pcDNA3.1-LMP2真核表达载体的构建 | 第41-43页 |
·G418筛选阳性克隆 | 第43-44页 |
·建立EBV感染上皮细胞模型 | 第44页 |
·裸鼠移植瘤实验 | 第44页 |
·统计学分析 | 第44-46页 |
第三章 结果 | 第46-92页 |
第一部分 EBV对miR-203表达的影响 | 第46-61页 |
·EBV在上皮细胞中所调控的miRNA筛选 | 第46-47页 |
·miRNA芯片结果进行验证 | 第47-48页 |
·EBV感染上皮细胞系的构建 | 第48-50页 |
·miR-203在EBV感染的细胞和低分化NPC组织中表达下调 | 第50-60页 |
小结 | 第60-61页 |
第二部分 miR-203的生物信息学分析及其下游靶基因的预测与实验验证 | 第61-69页 |
·生物信息学分析miR-203的基本信息 | 第61-63页 |
·miR-203下游靶基因预测 | 第63-64页 |
·对预测的miR-203潜在靶基因进行实验验证 | 第64-69页 |
小结 | 第69页 |
第三部分 miR-203对上皮细胞的生物学功能的影响 | 第69-77页 |
·MTT实验检测miR-203对293-EBV细胞增殖的影响 | 第69-70页 |
·流式细胞术检测miR-203对293-EBV细胞周期进程的影响 | 第70-73页 |
·miR-203对裸鼠移植瘤细胞生长的影响 | 第73-77页 |
第四部分 LMP1是EBV调控miR-203的关键蛋白 | 第77-90页 |
·EBV编码的潜伏蛋白LMP1及LMP2对miR-203的表达影响 | 第77-84页 |
·LMP1激活NF-кB和JNK信号通路参与调控miR-203的表达 | 第84-88页 |
·在鼻咽癌组织中LMP1与miR-203的表达量的关系 | 第88-90页 |
第五部分 NPC组织中miR-203的表达与临床意义 | 第90-92页 |
第四章 讨论 | 第92-106页 |
第一部分 EBV对iniR-203表达的影响 | 第92-95页 |
第二部分 LMP1是EBV调控miR-203的关键蛋白 | 第95-100页 |
第三部分 EBV-miRNA-班基因的交互作用是鼻咽癌的发病学机制 | 第100-106页 |
结论 | 第106-107页 |
参考文献 | 第107-118页 |
综述 | 第118-137页 |
参考文献 | 第127-137页 |
致谢 | 第137-139页 |
攻读博士期间获得的学术成果 | 第139-140页 |