| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-19页 |
| ·柑橘遗传转化技术研究进展 | 第13-15页 |
| ·品种及外植体 | 第13-14页 |
| ·目的基因 | 第14-15页 |
| ·筛选标记基因和选择基因 | 第14页 |
| ·抗病虫害基因 | 第14-15页 |
| ·提高抗逆性基因 | 第15页 |
| ·遗传转化的方法 | 第15-16页 |
| ·影响转化效率的因素 | 第16-17页 |
| ·基因型 | 第16页 |
| ·外植体 | 第16-17页 |
| ·组培难易度 | 第17页 |
| ·转化过程 | 第17页 |
| ·凝集素基因的介绍 | 第17-18页 |
| ·研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 枳壳凝集素基因克隆及表达载体构建 | 第19-36页 |
| ·试验材料与方法 | 第19-20页 |
| ·试验材料 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·质粒及菌株 | 第19页 |
| ·PCR引物设计 | 第19-20页 |
| ·试验方法 | 第20-23页 |
| ·枳壳叶片总RNA的提取 | 第20页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第20-21页 |
| ·枳壳凝集素基因克隆 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第22页 |
| ·质粒DNA的小量制备和纯化 | 第22-23页 |
| ·原核表达载体的构建及表达产物的检测 | 第23-24页 |
| ·原核表达载体的构建策略 | 第23-24页 |
| ·枳壳凝集素基因的原核表达 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE检测枳壳凝集素基因重组蛋白 | 第24页 |
| ·植物表达载体的构建策略 | 第24-26页 |
| ·结果与分析 | 第26-36页 |
| ·枳壳凝集素基因克隆 | 第26-29页 |
| ·枳壳凝集素基因的序列测定及分析 | 第27-29页 |
| ·枳壳凝集素基因结构示意图 | 第29页 |
| ·枳壳凝集素基因原核表达载体构建及表达产物的检测 | 第29-34页 |
| ·酶切获得目标片段 | 第29-30页 |
| ·质粒DNA的小量制备和纯化 | 第30页 |
| ·重组质粒pMD18-T-PTA-NH15经Nco Ⅰ和HindⅢ双酶切 | 第30-32页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第32-34页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第34-36页 |
| ·质粒pCAMBIA1301S-PTA-BS15经BamHⅠ和SalⅠ双酶切 | 第34页 |
| ·重组质粒转化EHA105感受态细胞菌液PCR产物电泳图 | 第34-36页 |
| 第三章 凝集素基因柑橘及烟草遗传转化研究 | 第36-61页 |
| ·材料与方法 | 第36-41页 |
| ·转化受体材料 | 第36-37页 |
| ·试验方法 | 第37-41页 |
| ·取材及预处理 | 第37页 |
| ·烟草组织培养 | 第37页 |
| ·甜橙及夏橙供试材料培养 | 第37页 |
| ·根癌农杆菌转化烟草 | 第37-38页 |
| ·根癌农杆菌转化柑橘 | 第38-39页 |
| ·根癌农杆菌侵染液的制备 | 第38页 |
| ·侵染实验 | 第38-39页 |
| ·选择培养和再生 | 第39页 |
| ·PCR检测 | 第39页 |
| ·Southern blot验证 | 第39-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-55页 |
| ·根癌农杆菌转化烟草 | 第41-42页 |
| ·叶盘选择培养后存活率,再生率及转化率的统计分析 | 第42-43页 |
| ·几个因素对两种凝集素基因转化烟草叶盘时转化率的影响 | 第43-45页 |
| ·烟草叶盘对头孢霉素的敏感性实验 | 第43-44页 |
| ·侵染时间对烟草叶盘转化凝集素基因转化率的影响 | 第44-45页 |
| ·共培养时间对烟草叶盘转化凝集素基因转化率的影响 | 第45页 |
| ·枳壳凝集素基因农杆菌介导转化柑橘 | 第45-47页 |
| ·半夏凝集素基因农杆菌介导转化柑橘 | 第47页 |
| ·柑橘茎段选择培养后存活率,再生率及转化率的统计分析 | 第47-49页 |
| ·几个因素对枳壳凝集素基因及半夏凝集素基因转化柑橘的影响 | 第49-51页 |
| ·侵染时间对柑橘茎段转化凝集素基因转化率的影响 | 第49-50页 |
| ·共培养时间对柑橘茎段转化凝集素基因转化率的影响 | 第50-51页 |
| ·柑橘茎段对卡那霉素的敏感性试验研究 | 第51页 |
| ·柑橘抗性芽诱导生根 | 第51-53页 |
| ·抗性植株的检测 | 第53-55页 |
| ·抗性植株的PCR检测引物 | 第53-54页 |
| ·烟草转半夏凝集素基因抗性植株的PCR检测 | 第54页 |
| ·枳壳凝集素基因转柑橘部分再生植株的RT-PCR检测 | 第54-55页 |
| ·抗性植株的Southern blot验证 | 第55-57页 |
| ·总结与讨论 | 第57-61页 |
| ·枳壳凝集素基因的克隆 | 第57页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第58页 |
| ·农杆菌转化烟草 | 第58-59页 |
| ·农杆菌转化柑橘 | 第59页 |
| ·农杆菌转化效率 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录1 主要溶液及试剂的配置 | 第68-73页 |
| 附录2 pMD 18-T载体信息 | 第73-74页 |
| 附录3 pET-28a(+)载体信息 | 第74-75页 |
| 附录4 pCAMBIA1301S载体信息 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
