| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-14页 |
| 1 前言 | 第10页 |
| 2. 软体动物的免疫系统 | 第10-11页 |
| ·体液免疫系统 | 第10-11页 |
| ·细胞防御系统 | 第11页 |
| 3. 抗菌肽的研究进展 | 第11-12页 |
| ·抗菌肽的功能及特征 | 第11-12页 |
| ·抗菌肽基因克隆及表达研究 | 第12页 |
| 4 研究目的和意义 | 第12-14页 |
| 第二章 三角帆蚌抗菌肽theromacin基因cDNA全长克隆及生物信息学分析 | 第14-33页 |
| 1 材料与方法 | 第14-21页 |
| ·材料 | 第14-16页 |
| ·实验对象 | 第14页 |
| ·药品及试剂 | 第14页 |
| ·菌株及克隆载体 | 第14页 |
| ·主要实验仪器设备 | 第14-15页 |
| ·实验引物 | 第15-16页 |
| ·实验方法 | 第16-21页 |
| ·实验材料处理 | 第16页 |
| ·肝脏总RNA的提取 | 第16页 |
| ·SMART cDNA第一链的合成 | 第16-18页 |
| ·三角帆蚌抗菌肽theromacin基因cDNA片段的扩增 | 第18-19页 |
| ·PCR产物的回收及纯化 | 第19页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第19-20页 |
| ·PCR目的产物纯化、连接和转化 | 第20页 |
| ·theromacin基因序列分析 | 第20-21页 |
| ·系统发育树的构建 | 第21页 |
| 2 实验结果 | 第21-30页 |
| ·抗菌肽theromacin基因全长扩增 | 第21-23页 |
| ·RACE-PCR扩增结果 | 第21-22页 |
| ·抗菌肽theromacin基因全长序列拼接及分析 | 第22-23页 |
| ·抗菌肽theromacin蛋白质氨基酸序列分析 | 第23-30页 |
| ·氨基酸理化性质分析 | 第23-24页 |
| ·抗菌肽theromacin信号肽预测 | 第24-25页 |
| ·抗菌肽theromacin跨膜结构预测 | 第25-26页 |
| ·抗菌肽theromacin蛋白质亚细胞定位点预测 | 第26页 |
| ·抗菌肽theromacin二级结构预测 | 第26-27页 |
| ·抗菌肽theromacin三级结构预测 | 第27页 |
| ·抗菌肽theromacin氨基酸序列同源性分析 | 第27-30页 |
| ·抗菌肽theromacin蛋白系统进化树构建及分析 | 第30页 |
| 3 讨论 | 第30-32页 |
| 4 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 三角帆蚌抗菌肽theromacin基因的原核表达及组织差异表达 | 第33-48页 |
| 1 材料和方法 | 第33-40页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·实验动物 | 第33页 |
| ·菌株和质粒 | 第33页 |
| ·工具酶与试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器设备 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-40页 |
| ·三角帆蚌theromacin基因开放阅读框序列分析 | 第34页 |
| ·肝脏总RNA提取及cDNA第一链合成 | 第34页 |
| ·三角帆蚌theromacin开放阅读框的克隆及测序 | 第34-35页 |
| ·感受态细胞的制备及扩增产物测序验证 | 第35-36页 |
| ·重组表达载体pET32a(+)质粒提取 | 第36-37页 |
| ·theromacin基因ORF及pET32a(+)质粒双酶切 | 第37页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第37页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第37-38页 |
| ·抗菌肽theromacin基因的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·三角帆蚌theromacin基因表达的组织特异性及病理条件下表达的变化 | 第39-40页 |
| 2 实验结果 | 第40-46页 |
| ·三角帆蚌theromacin基因ORF的寻找及酶切位点分析 | 第40-41页 |
| ·theromacin基因ORF预测 | 第40页 |
| ·限制性内切酶位点分析结果如下 | 第40-41页 |
| ·三角帆蚌抗菌肽theromacin基因开放阅读框的扩增 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pET32a(+)-Ther的构建及酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的构建 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第44页 |
| ·三角帆蚌theromacin基因mRNA表达的组织特异性及病理条件下表达的变化 | 第44-46页 |
| 3 讨论 | 第46-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 附录A：转菌落测序图谱 | 第53-56页 |
| 附录B：英文缩写名词索引 | 第56-57页 |
| 附录C：抗菌肽theromacin GeneBank信息 | 第57-58页 |
| 附录D：pET32a(+)载体结构 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
