| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 文献综述 | 第11-26页 |
| 1 马铃薯Y病毒(PVY)的研究现状 | 第11-17页 |
| ·马铃薯Y病毒的生物学特性 | 第11页 |
| ·PVY株系的分类研究 | 第11-12页 |
| ·马铃挤Y病毒属病毒基因组的结构及功能 | 第12-16页 |
| ·马铃薯Y病毒病的防治 | 第16-17页 |
| 2 RNA沉默与植物抗病毒特性 | 第17-20页 |
| ·RAN沉默在生物界存在的普遍性 | 第17页 |
| ·RNA沉默的机制 | 第17-19页 |
| ·构建反向重复产生dsRNA可以介导高效基因沉默 | 第19-20页 |
| 3 RNA沉默是植物自然的抗病毒机制 | 第20-21页 |
| 4 RNA沉默的病毒抑制子 | 第21-26页 |
| ·RNA沉默的病毒抑制子种类 | 第21-23页 |
| ·RNA沉默抑制子抑制基因沉默的机制 | 第23-24页 |
| ·马铃薯Y属病毒(Potyvirus)HC-Pro | 第23-24页 |
| ·黄瓜花叶病毒(CMV)2b | 第24页 |
| ·马铃薯X病毒(PVX)P25 | 第24页 |
| ·RNA沉默病毒抑制子的应用前景 | 第24-26页 |
| 引言 | 第26-28页 |
| 材料与方法 | 第28-41页 |
| 1 供试材料 | 第28页 |
| ·病样采集 | 第28页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·菌种和载体 | 第28页 |
| ·酶和化学试剂 | 第28页 |
| ·常用缓冲溶液和培养基 | 第28页 |
| ·抗生素 | 第28页 |
| ·仪器设备 | 第28页 |
| 2 试验方法 | 第28-41页 |
| ·植物病毒的ELISA检测 | 第28-29页 |
| ·DNA分子操作常用方法 | 第29-32页 |
| ·叶片总RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·cDNA的合成 | 第30页 |
| ·PCR技术 | 第30-31页 |
| ·RT-PCR扩增技术 | 第31页 |
| ·Nested-PCR扩增技术 | 第31页 |
| ·Overlap Extension PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·PCR产物的克隆和序列分析 | 第32-34页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第32页 |
| ·PCR产物的连接 | 第32-33页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·连接产物的转化 | 第33页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第34页 |
| ·克隆基因的序列测定、分析和登录 | 第34页 |
| ·外壳蛋白(CP)基因的获得 | 第34-35页 |
| ·外壳蛋白(CP)基因的引物设计与合成 | 第34-35页 |
| ·cDNA合成及外壳蛋白(CP)基因的RT-PCR扩增 | 第35页 |
| ·HC-Pro基因的获得 | 第35-36页 |
| ·HC-Pro基因的引物设计与合成 | 第35页 |
| ·HC-Pro的Nested-PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·反向重复植物表达载体的构建 | 第36-39页 |
| ·△HC-Pro片段的获得 | 第37页 |
| ·△HC-Por反向重复植物表达载体的构建 | 第37-39页 |
| ·反向重复植物表达载体导入农杆菌(三亲交配法) | 第39页 |
| ·烟草转化及卡那霉素抗性植株的再生 | 第39-41页 |
| 结果与分析 | 第41-49页 |
| 1 病毒的ELISA检测结果 | 第41页 |
| 2 外壳蛋白(CP)基因的获得 | 第41-44页 |
| ·CP基因的RT-PCR扩增 | 第41-42页 |
| ·CP基因的克隆和序列分析 | 第42-44页 |
| 3 HC-Pro基因的获得 | 第44-45页 |
| ·HC-Pro的PCR扩增 | 第44页 |
| ·HC-Pro的克隆和序列分析 | 第44-45页 |
| 4 反向重复植物表达载体的构建 | 第45-49页 |
| ·△HC-Pro片段的获得 | 第45-46页 |
| ·△HC-Pro反向重复植物表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·烟草的转化和卡那抗性植株的获得 | 第47-49页 |
| 讨论 | 第49-52页 |
| 1 马铃薯Y病毒的外壳蛋白(CP)基因 | 第49页 |
| 2 PVY HC-Pro基因 | 第49-50页 |
| 3 内含子的使用和选择 | 第50页 |
| 4 反向重复植物表达载体构建策略 | 第50页 |
| 5 dsRNA介导的抗性的应用 | 第50-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 附录A | 第61-65页 |
| 附录B | 第65-66页 |
| 附录C | 第66-68页 |
| 附录D | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第70页 |