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亚洲棉CAP基因的克隆、表达与蛋白鉴定

摘要第1-8页
Abstract第8-15页
第一章 引言第15-32页
   ·栽培棉的纤维性状主要来源于A亚基因组第16页
   ·棉纤维发育过程及其物质代谢第16-20页
     ·棉纤维原始细胞分化、突起第17-18页
     ·棉纤维细胞的伸长第18-20页
     ·棉纤维细胞次生壁合成和增厚第20页
     ·棉纤维细胞脱水成熟第20页
   ·纤维突变体在分子生物学研究中的应用第20-23页
     ·纤维突变体应用于纤维细胞突起分化的研究第21-22页
     ·纤维突变体在分子标记辅助育种中的利用第22页
     ·纤维突变体在纤维发育相关基因结构和功能研究上的应用第22-23页
   ·植物表皮毛(纤维)细胞发育的遗传模型第23页
   ·棉纤维发育早期的分子机理第23-24页
   ·棉纤维基因第24-27页
   ·CAP基因的研究进展第27-30页
     ·CAP蛋白的结构域特征第28页
     ·CAP蛋白与Actin的作用机制第28-29页
     ·CAP蛋白的功能第29页
     ·CAP基因在植物中的研究进展第29-30页
   ·本文的研究意义与研究内容第30-32页
     ·研究意义第30-31页
     ·研究内容第31-32页
第二章 实验材料和方法第32-64页
   ·实验材料第32-34页
     ·实验材料采集第32页
     ·载体和菌株第32-33页
     ·酶及其它试剂耗材第33页
     ·试验设备第33-34页
     ·试剂盒第34页
     ·引物合成第34页
   ·试验方法第34-64页
     ·棉花DNA的提取第34-36页
     ·PCR筛选确定目的基因第36-38页
     ·棉花RNA的提取第38-43页
     ·PCR检测并克隆目的基因片段第43-48页
     ·RT-PCR和Northern杂交第48-53页
     ·棉花目标DNA序列的分离第53-54页
     ·Southern杂交第54页
     ·目标蛋白诱导纯化第54-61页
     ·蛋白活性鉴定第61-64页
第三章 结果与分析第64-87页
   ·DNA的提取第64页
   ·基因组DNA PCR扩增第64-65页
   ·RNA的提取第65-67页
   ·cDNA PCR扩增第67页
   ·目标片段的克隆与测序第67-77页
     ·获得目的基因序列第67-69页
     ·测序结果及亚洲棉CAP基因的结构分析第69-74页
     ·推导蛋白的结构分析第74-75页
     ·蛋白跨膜结构域的预测第75-76页
     ·CAP蛋白信号肽预测第76页
     ·CAP蛋白卷曲螺旋结构的预测第76-77页
   ·CAP基因的表达分析第77-79页
     ·RNA的提取第77页
     ·RT-PCR结果第77-78页
     ·Northern杂交结果第78-79页
   ·Southern Blotting杂交结果分析第79-81页
     ·基因组DNA的凝胶电泳检测第79-80页
     ·基因组DNA的限制性内切酶消化第80页
     ·DIG探针标记效率检测第80页
     ·使用DIG标记的探针进行Southern杂交第80-81页
     ·使用同位素~(32)P标记的探针进行Southern杂交第81页
   ·GaCAP蛋白原核表达、纯化与基本生化性质鉴定第81-87页
     ·GaCAP基因原核表达载体的构建第81-82页
     ·GaCAP氨基酸序列的亲水性检测第82页
     ·GaCAP融合蛋白的表达纯化第82-83页
     ·GaCAP融合蛋白的活性鉴定第83-87页
第四章 讨论第87-93页
   ·棉纤维发育相关基因在野生型及突变体基因组DNA中的扩增第87-88页
   ·对棉花不同组织器官RNA提取的探讨第88-89页
   ·腺苷酸环化酶结合蛋白(CAP)分子结构特征与功能预测分析第89页
   ·CAP基因的结构及其同源性分析第89-90页
   ·CAP基因在短绒突变体及其野生型胚珠中的序列结构和表达分析第90-91页
   ·亚洲棉GaCAP蛋白原核表达条件优化及理化性质鉴定第91-93页
第五章 结论第93-94页
第六章 总结及展望第94-96页
参考文献第96-112页
附录第112-117页
致谢第117-119页
作者简历第119页

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