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OsMAPK4基因水稻突变体的培育及功能分析

摘要第1-8页
ABSTRACT第8-10页
1 引言第10-21页
   ·本研究的目的和意义第10-11页
   ·文献综述第11-20页
     ·植物对盐胁迫的反应和耐盐性第11-12页
     ·植物盐胁迫信号的转导过程第12-15页
     ·MAPKs 在植物耐受渗透胁迫过程中的作用研究第15-18页
     ·RNAi 技术及其在植物中的应用研究第18-19页
     ·基因芯片技术的应用及表达谱的分析第19-20页
   ·本论文的主要研究内容第20-21页
2 材料与方法第21-36页
   ·OSMAPK4 基因RNAI 载体PCMI 的构建第21-25页
     ·试验材料第21页
     ·试验方法第21-25页
   ·农杆菌介导法转化水稻第25-26页
     ·试验材料第25-26页
     ·试验方法第26页
   ·抗性水稻植株的PCR 检测第26-28页
     ·试验材料第26-27页
     ·试验方法第27-28页
   ·PCR 阳性植株T1 代幼苗的BIALAPHOS 筛选及PCR 检测第28-29页
     ·PCR 阳性植株T1 代幼苗的Bialaphos 筛选第28-29页
     ·抗Bialaphos 植株的PCR 检测第29页
   ·转PCME12 的PCR 阳性植株T1 代幼苗的耐盐性检测第29-30页
     ·试验材料第29-30页
     ·试验方法第30页
   ·目的基因转录的实时荧光定量PCR (REAL-TIME PCR)检测第30-34页
     ·试验材料第30-31页
     ·试验方法第31-34页
   ·转基因植株的转录组分析第34-35页
     ·水稻OsMAPK4 基因芯片杂交材料的准备第34页
     ·芯片杂交结果的生物信息学分析方法第34页
     ·OsMAPK4 基因下游基因的分析第34-35页
   ·统计分析方法第35-36页
3. 结果与分析第36-62页
   ·植物表达载体的构建第36-41页
     ·植物低表达载体pCMI 的构建第36-40页
     ·重组质粒导入根癌农杆菌第40-41页
   ·农杆菌介导法转化水稻第41-42页
   ·抗性水稻植株的PCR 检测第42-43页
     ·转OsMAPK4 基因抗性植株的PCR 检测第42-43页
   ·PCR 阳性植株T1 代幼苗的BIALAPHOS 筛选及PCR 检测第43-47页
     ·T1 代幼苗Bialaphos 筛选第43-46页
     ·T1 代Bialaphos 筛选存活植株的PCR 检测第46-47页
   ·转PCME12 的PCR 阳性植株T1 代幼苗的耐盐性检测第47-51页
     ·种子发芽期NaCl 筛选压力的确定第47-49页
     ·转pCME12 PCR 阳性植株的T1 代种子耐盐性检测第49-51页
   ·目的基因转录的实时荧光定量PCR (REAL-TIME PCR)检测第51-57页
     ·RNA 的提取、纯化及RT-PCR 检测第51页
     ·引物筛选第51-53页
     ·目的基因转录的实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测第53-57页
   ·转基因植株的转录组分析第57-62页
     ·准备实验材料送交芯片公司第57页
     ·芯片数据的初步分析第57-58页
     ·转录组表达差异分析第58-60页
     ·盐胁迫下水稻基因表达谱分析第60-62页
4 讨论第62-64页
   ·RNAI 技术的应用第62页
   ·基因表达谱技术的应用第62页
   ·利用抗BIA 株系筛选T1 代转基因植株的可行性第62-63页
   ·转OSMAPK4 基因植株抗逆性提高的分子机理第63-64页
5 结论第64-66页
   ·构建了植物表达载体PCMI第64页
   ·获得了转PCMI 和转PME12 水稻PCR 阳性植株第64页
   ·筛选得到抗BIALAPHOS 且PCR 检测呈阳性的T1 代植株第64页
   ·分析了转PME12T1 代水稻植株的耐盐性第64页
   ·检测了转基因植株在正常及盐诱导后OSMAPK4 基因的转录水平第64-66页
致谢第66-67页
参考文献第67-70页
攻读学位期间发表的学术论文第70页

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