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芍药苷对小鼠日本血吸虫病肝纤维化信号转导通路的影响

中文摘要第1-13页
ABSTRACT第13-19页
1 前言第19-23页
2 材料与方法第23-46页
   ·实验动物第23页
   ·含尾蚴的阳性钉螺第23页
   ·引物第23-24页
   ·药物及试剂第24-26页
   ·部分主要试剂的配制第26-27页
   ·仪器与设备第27-29页
   ·尾蚴诱导的日本血吸虫病肝纤维化小鼠模型的制备第29页
   ·动物分组、给药方案与标本采集处理第29-30页
   ·小鼠肝脏组织病理学检查第30-31页
     ·组织芯片制作第30页
     ·病理组织学观察及分级标准第30-31页
     ·小鼠肝脏TGFβ1 免疫组化染色定量分析第31页
   ·SEA 的制备、浓度测定、保存第31-33页
     ·SEA 的制备第31-32页
     ·SEA 蛋白浓度测定(Lowry 法)第32页
     ·SEA 蛋白的保存第32-33页
   ·小鼠PMS 的分离、培养第33页
   ·小鼠HSCS 的分离、培养第33-34页
   ·PAE 、SB-431542 对小鼠PMS、HSCS 毒性的检测第34页
   ·SEA 刺激的PMCM 制备第34-41页
     ·刺激小鼠PMs 分泌TGFβ1 的最适SEA 蛋白浓度的选择第34-41页
     ·stimulated-PMCM 的收集、保存第41页
   ·PAE 对SEA 刺激的PMS 内的TGFΒ1 基因和蛋白表达的影响第41-42页
   ·SEA 对小鼠HSCS 分泌TGFΒ1 的影响第42页
     ·细胞分组第42页
     ·ELISA 测定经SEA 刺激的细胞上清中TGFβ1 含量第42页
   ·刺激小鼠HSCS 增殖的OPMCM 选择第42-43页
     ·细胞分组第42-43页
     ·MTT 法测定HSCs 增殖第43页
   ·OPMCM 中的TGFΒ1 对HSCS 增殖和COL I 、III 分泌的影响第43页
   ·PAE 对OPMCM 刺激小鼠HSCS 增殖的影响第43-44页
     ·细胞分组第43页
     ·MTT 法测定OPMCM 刺激的HSCs 增殖第43-44页
   ·PAE 对OPMCM 刺激小鼠HSCS 分泌COL I 和COL III 的影响第44-45页
     ·细胞分组第44页
     ·ELISA 检测HSCs 上清中Col I 和Col III 浓度第44页
     ·细胞层蛋白的提取和浓度测定第44-45页
   ·PAE 对OPMCM 刺激的SMADS 和前胶原基因或蛋白表达的影响..第45页
   ·统计学处理第45-46页
3 结果第46-65页
   ·PAE 对小鼠肝组织肉芽肿、纤维化及TGFΒ1 表达的影响第46-48页
   ·SEA 浓度第48页
   ·小鼠PMS 和HSCS 原代培养的细胞形态第48-50页
   ·PAE 对小鼠PMS、HSCS 以及SB-431542 对小鼠HSCS 毒性检测..第50-51页
     ·镜下观察第50页
     ·细胞活力测定第50页
     ·细胞上清中LDH 活性检测第50-51页
   ·刺激小鼠PMS 分泌TGFΒ1 的最适SEA 蛋白浓度的选择第51-53页
     ·ELISA 测定经SEA 刺激的PMs 上清中TGFβ1 含量第51-52页
     ·RT-PCR 和Western blotting 检测TGFβ1 基因和蛋白的表达第52-53页
   ·SEA 对小鼠HSCS 分泌TGFΒ1 的影响第53-56页
   ·PAE 对SEA 刺激的PMS 内的TGFΒ1 基因和蛋白表达的影响第56-57页
   ·OPMCM 稀释度的选择第57-58页
   ·OPMCM 中的TGFΒ1 对HSCS 增殖和COL I、III 分泌的影响第58页
   ·PAE 对OPMCM 刺激小鼠HSCS 增殖的影响第58-60页
   ·PAE 对OPMCM 刺激小鼠HSCS 分泌COL I 和COL III 的影响第60-61页
   ·PAE 对OPMCM 刺激的HSCS 内COL IΑ1、COL IIIΑ1 和SMADS 基因或蛋白表达的影响第61-65页
     ·PAE 对OPMCM 刺激的HSCs 内Col Iα1、Col IIIα1 基因和蛋白表达的影响第61-62页
     ·PAE 对OPMCM 刺激的HSCs 内Smad2/3 蛋白表达和Smad2/3 蛋白磷酸化的影响第62-64页
     ·PAE 对Smad3 的影响第64-65页
4 讨论第65-71页
   ·TGFΒ1 与血吸虫病肝肉芽肿和肝纤维化有关第65-66页
   ·SEA 可直接促进MFS 分泌TGFΒ1,而PAE 抑制MFS 分泌TGFΒ1第66-67页
   ·TGFΒ1 能促进HSCS 增殖和胶原分泌,而PAE 能抑制HSCS 增殖和胶原分泌第67-68页
   ·PAE 抑制SMAD3 MRNA 的表达和蛋白磷酸化第68-71页
5 结论第71-72页
6 今后实验打算第72-73页
7 参考文献第73-78页
附录一(个人简历)第78-80页
附录二 (致谢)第80-82页
附录三(综述)第82-99页

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