缩略词表 | 第1-11页 |
中文摘要 | 第11-13页 |
英文摘要 | 第13-15页 |
第一部分 禽1型副粘病毒研究动态 | 第15-36页 |
引言 | 第15页 |
1 禽1型副粘病毒——新城疫病毒概述 | 第15-31页 |
·新城疫病毒分类地位与形态、结构 | 第16页 |
·新城疫病毒生物学性质 | 第16-17页 |
·新城疫病毒流行病学特点 | 第17-18页 |
·新城疫病毒临床症状与剖检病变 | 第18-19页 |
·新城疫病毒分子生物学 | 第19-29页 |
·新城疫病毒致病力的分子基础 | 第29-30页 |
·新城疫病毒分子诊断技术 | 第30-31页 |
2 水禽感染禽1型副粘病毒的研究进展 | 第31-34页 |
·鸭感染禽1型副粘病毒 | 第32-33页 |
·鹅感染禽1型副粘病毒 | 第33-34页 |
·其他水禽感染禽1型副粘病毒 | 第34页 |
3 研究的目的和意义 | 第34-36页 |
第二部分 研究内容 | 第36-90页 |
第1章 番鸭源禽1型副粘病毒P基因的克隆与测序 | 第36-50页 |
1 材料 | 第36-38页 |
·毒株、鸡胚、载体与菌株 | 第36-37页 |
·主要试剂 | 第37页 |
·主要仪器 | 第37-38页 |
·引物 | 第38页 |
2 方法 | 第38-45页 |
·病毒的扩增 | 第38页 |
·病毒RNA提取 | 第38-39页 |
·P基因的RT-PCR扩增 | 第39-40页 |
·P基因的回收和纯化 | 第40-41页 |
·重组质粒PMD-P的构建 | 第41-45页 |
3 结果与分析 | 第45-48页 |
·RT-PCR的结果 | 第45页 |
·重组质粒的鉴定 | 第45-47页 |
·序列测定结果 | 第47-48页 |
4 讨论 | 第48-50页 |
·RNA提取 | 第48-49页 |
·引物设计 | 第49页 |
·酶切鉴定 | 第49-50页 |
第2章 番鸭源禽1型副粘病毒P基因的生物信息学分析 | 第50-68页 |
1 实验方法 | 第50-52页 |
·序列的Blast分析 | 第50页 |
·ORF分析及可靠性检验 | 第50-51页 |
·P蛋白功能分析 | 第51-52页 |
2 结果与分析 | 第52-66页 |
·Blast分析结果 | 第52页 |
·ORF分析及可靠性检验 | 第52-53页 |
·P蛋白功能分析 | 第53-66页 |
3 讨论 | 第66-68页 |
·蛋白的结构特点与表达特性 | 第66页 |
·蛋白结构与功能关系 | 第66-67页 |
·抗原决定簇预测 | 第67-68页 |
第3章 番鸭源禽1型副粘病毒P基因的原核表达及其产物的纯化鉴定 | 第68-90页 |
1 材料 | 第68-69页 |
·表达载体与菌株 | 第68页 |
·主要试剂 | 第68-69页 |
·主要仪器 | 第69页 |
2 方法 | 第69-77页 |
·引物 | 第69页 |
·阳性重组子的质粒的小量提取 | 第69页 |
·PCR扩增及其产物的纯化回收 | 第69-70页 |
·重组表达载体的构建 | 第70-72页 |
·阳性重组质粒的鉴定 | 第72-73页 |
·序列测定分析 | 第73页 |
·重组质粒的诱导表达 | 第73-74页 |
·重组质粒表达条件的优化 | 第74页 |
·融合蛋白的可溶性分析 | 第74-75页 |
·蛋白的纯化 | 第75-76页 |
·western-blot分析 | 第76-77页 |
·重组表达蛋白的ELISA分析 | 第77页 |
3 结果与分析 | 第77-88页 |
·P基因的PCR扩增 | 第78页 |
·重组表达载体的构建 | 第78页 |
·重组质粒的鉴定 | 第78-80页 |
·重组质粒在宿主菌中的诱导表达结果 | 第80-81页 |
·重组质粒表达条件的优化 | 第81-83页 |
·融合蛋白的可溶性分析 | 第83-84页 |
·目的蛋白的纯化 | 第84-85页 |
·Western-blot鉴定结果 | 第85-86页 |
·间接ELISA反应条件的确定 | 第86-88页 |
4 讨论 | 第88-90页 |
·影响原核表达的因素 | 第88-89页 |
·表达系统的选择 | 第89页 |
·表达产物的活性鉴定 | 第89-90页 |
全文总结 | 第90-91页 |
参考文献 | 第91-100页 |
附录 | 第100-105页 |
致谢 | 第105-106页 |
个人简介 | 第106页 |