| CONTENT | 第1-12页 |
| 摘要 | 第12-16页 |
| ABSTRACT | 第16-20页 |
| 符号说明 | 第20-24页 |
| 第一章 绪论 | 第24-48页 |
| ·糖生物学的发展 | 第25-26页 |
| ·寡糖的制备 | 第26-31页 |
| ·化学合成法 | 第26-27页 |
| ·多糖降解法 | 第27-29页 |
| ·酶法合成寡糖技术 | 第29-31页 |
| ·乙酰氨基葡萄糖 | 第31-32页 |
| ·糖核苷酸 | 第32-37页 |
| ·糖核苷酸的种类 | 第32-33页 |
| ·生物体内糖核苷酸的合成 | 第33-35页 |
| ·糖核苷酸转运 | 第35-36页 |
| ·不同糖核苷酸之间的转化途径的建立 | 第36-37页 |
| ·UDP-GLCNAC | 第37-45页 |
| ·UDP-GlcNAc的化学合成 | 第39-40页 |
| ·UDP-GlcNAc的酶法合成 | 第40-43页 |
| ·UDP-GlcNAc的化学-酶法合成 | 第43-44页 |
| ·UDP-GlcNAc的生理意义 | 第44-45页 |
| ·GLCNAc-1-P尿苷转移酶(GLMU) | 第45-47页 |
| ·论文内容大纲 | 第47-48页 |
| 第二章 ESCHERICHIA COLI K12 GLMU的基因克隆和性质研究 | 第48-68页 |
| ·材料 | 第48-53页 |
| ·方法 | 第53-59页 |
| ·大肠杆菌GlmU基因的扩增 | 第53-55页 |
| ·GlmU重组表达载体的构建 | 第55-57页 |
| ·重组质粒的验证 | 第57页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3) | 第57页 |
| ·GlmU的表达和纯化 | 第57-58页 |
| ·GlmU酶活分析 | 第58-59页 |
| ·GlmU酶活的毛细管电泳检测 | 第59页 |
| ·GlmU对GlcNAc-1-P衍生物的底物识别能力研究 | 第59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-67页 |
| ·GlmU重组表达载体的构建 | 第59-61页 |
| ·GlmU蛋白的表达与纯化 | 第61-63页 |
| ·GlmU酶活分析 | 第63-64页 |
| ·ESI-MS分析 | 第64-66页 |
| ·GlmU对GlcNAc-1-P衍生物的底物识别能力研究 | 第66-67页 |
| ·本章小结 | 第67-68页 |
| 第三章 GLMU-TR229底物广泛性系统研究 | 第68-106页 |
| ·材料 | 第71页 |
| ·方法 | 第71-76页 |
| ·GlmU-Tr229引物序列设计 | 第71页 |
| ·GlmU-Tr229载体构建及蛋白表达 | 第71页 |
| ·GlmU-Tr229酶活测定 | 第71-72页 |
| ·GlmU-Tr229 NTP底物适应性研究 | 第72页 |
| ·GlcNAc C2位乙酰基对GlmU-Tr229酶活影响分析 | 第72页 |
| ·反应副产物IPP对UDP-GlcNAc合成效率的影响 | 第72-73页 |
| ·GlmU-Tr229对糖-1-P和NTP双底物利用广泛性研究 | 第73页 |
| ·GlmU-Tr229蛋白浓度与不同底物催化能力关系的分析 | 第73页 |
| ·GlcNAcZ-1-P的化学合成方法 | 第73-74页 |
| ·dUDP-GlcNAc和UDP-GlcNAcZ的小规模制备 | 第74-75页 |
| ·dUDP-GlcNAc和UDP-GlcNAcZ的分离纯化 | 第75页 |
| ·分析和定性 | 第75页 |
| ·不同金属离子对GlmU-Tr229催化活性的影响分析 | 第75-76页 |
| ·不同Mg~(2+)浓度对GlmU-Tr229催化活性的影响分析 | 第76页 |
| ·不同pH条件对GlmU-Tr229催化活性的影响分析 | 第76页 |
| ·结果讨论 | 第76-104页 |
| ·GlmU-Tr229目的基因的克隆 | 第76-77页 |
| ·重组质粒琼脂糖电泳检测 | 第77-78页 |
| ·GlmU-Tr229蛋白表达纯化 | 第78-80页 |
| ·GlmU-Tr229酶活分析结果 | 第80-81页 |
| ·GlcNAc C2位乙酰氨基对GlmU-Tr229酶活影响分析 | 第81-82页 |
| ·反应副产物IPP对UDP-GlcNAc合成效率的影响 | 第82-83页 |
| ·GlmU-Tr229对NTP底物识别特异性系统研究 | 第83-85页 |
| ·NDP-糖的分离纯化 | 第85-87页 |
| ·NDP-糖MS分析结果 | 第87-90页 |
| ·dUDP-GlcNAc和UDP-GlcNAcZ的NMR分析检测 | 第90-97页 |
| ·GlmU-Tr229蛋白浓度与不同底物催化能力关系的分析 | 第97-100页 |
| ·GlmU-Tr229催化反应与金属离子之间的关系 | 第100-101页 |
| ·Mg~(2+)浓度对GlmU-Tr229催化能力的影响分析 | 第101页 |
| ·pH对GlmU-Tr229催化能力的影响关系 | 第101-102页 |
| ·GlmU与GlmU-Tr229蛋白活性对比 | 第102-104页 |
| ·章节小结 | 第104-106页 |
| 第四章 GLMU-TR229点突变研究 | 第106-118页 |
| ·材料 | 第109页 |
| ·方法 | 第109-112页 |
| ·引物序列设计 | 第109-110页 |
| ·GlmU-Tr229定点突变 | 第110页 |
| ·GlcNAc-1-P的酶法合成 | 第110-111页 |
| ·GlcNAc-1-P的分离纯化 | 第111-112页 |
| ·GlmU-Tr229 Q76E酶活分析 | 第112页 |
| ·结果与讨论 | 第112-116页 |
| ·GlmU-Tr229定点突变研究 | 第112-113页 |
| ·GlcNAc-1-P的合成与分离纯化 | 第113-114页 |
| ·GlmU-Tr229 Q76E酶活分析 | 第114-116页 |
| ·章节小结 | 第116-118页 |
| 全文总结 | 第118-120页 |
| 参考文献 | 第120-138页 |
| 致谢 | 第138-140页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第140-142页 |
| 外文论文 | 第142-150页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第150页 |
