禽流感病毒基因PA、M2的克隆、表达、纯化及多克隆抗体的制备
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 引言 | 第9-16页 |
| ·禽流感的病原学 | 第9-11页 |
| ·病原与毒力鉴定 | 第9-10页 |
| ·禽流感病毒的化学组成及理化特性 | 第10页 |
| ·禽流感病毒基因组结构及复制 | 第10-11页 |
| ·禽流感致病性的分子生物学基础 | 第11-12页 |
| ·禽流感抗原变异 | 第12-13页 |
| ·禽流感的国内外流行情况 | 第13-14页 |
| ·禽流感的国内流行情况 | 第13页 |
| ·禽流感的国外流行情况 | 第13-14页 |
| ·禽流感的防制研究进展 | 第14-15页 |
| ·禽流感研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 2 AIV PA基因的克隆及表达载体的构建 | 第16-32页 |
| ·材料 | 第16-18页 |
| ·AIV PA基因 | 第16页 |
| ·载体与菌株 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·试验所用溶液及其配制 | 第16-18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-24页 |
| ·AIV PA基因的扩增 | 第18-19页 |
| ·PCR产物回收 | 第19页 |
| ·目的片段及载体质粒的酶切 | 第19-20页 |
| ·重组质粒(pGEX-PA)的构建 | 第20页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第20-21页 |
| ·重组质粒的转化 | 第21页 |
| ·重组质粒的小量制备 | 第21页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第21-22页 |
| ·序列测定与分析 | 第22页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第22-24页 |
| ·结果与分析 | 第24-30页 |
| ·PCR扩增目的片段PA基因 | 第24页 |
| ·目的片段及载体质粒的酶切 | 第24-25页 |
| ·重组克隆载体的构建 | 第25-26页 |
| ·重组克隆载体的PCR及酶切鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组质粒目的基因的序列测定 | 第27-28页 |
| ·重组表达载体pGEX-PA的构建及鉴定 | 第28-30页 |
| ·构建的重组表达载体的序列测定 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| ·关于引物设计以及PCR条件的确定 | 第30-31页 |
| ·关于PA基因的核苷酸序列分析 | 第31页 |
| ·关于表达载体的选择 | 第31-32页 |
| 3 AIV M2的表达、纯化及多克隆抗体制备 | 第32-44页 |
| ·材料 | 第32-35页 |
| ·AIV M2表达载体 | 第32页 |
| ·菌株 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·试验所用溶液及其配制 | 第32-35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-39页 |
| ·重组表达菌的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·重组表达菌表达条件的优化 | 第36页 |
| ·重组表达菌表达产物的纯化 | 第36-38页 |
| ·融合蛋白的动物免疫 | 第38页 |
| ·用western-blot检测多克隆抗体 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-42页 |
| ·重组表达菌的诱导表达 | 第39-40页 |
| ·重组表达菌表达条件的优化 | 第40-41页 |
| ·重组表达菌表达产物的纯化 | 第41页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第41页 |
| ·多克隆抗体的western-blot检测 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 4 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第50-51页 |
| 作者简历 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 附录 | 第53-57页 |
