| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 综述 | 第11-25页 |
| 1 水生动物中重金属的影响 | 第11-12页 |
| 2 镉与金属硫蛋白(MT) | 第12-15页 |
| ·镉的理化性质 | 第12-13页 |
| ·镉的生物学作用 | 第13页 |
| ·重金属诱导金属硫蛋白研究进展 | 第13-15页 |
| 3 大肠杆菌原核表达系统 | 第15-19页 |
| ·原核表达系统 | 第15页 |
| ·表达载体的类型及研究进展 | 第15-17页 |
| ·大肠杆菌中外源蛋白高效表达的影响因素 | 第17-19页 |
| 4 金属硫蛋白的生理功能与研究进展 | 第19-22页 |
| ·MT的理化性质和结构特点 | 第19-20页 |
| ·MT的生物学功能 | 第20页 |
| ·MT的分类 | 第20-21页 |
| ·MT的应用 | 第21页 |
| ·MT分子生物学的研究现状及进展 | 第21-22页 |
| 5 本文研究的目的、意义和内容 | 第22-25页 |
| 第二章 重组表达载体pQE31-MT的构建 | 第25-37页 |
| 摘要 | 第25页 |
| 1 实验材料 | 第25-26页 |
| ·菌种及试剂 | 第25页 |
| ·溶液 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| 2 实验方法 | 第26-31页 |
| ·重组质粒构建流程图 | 第26-27页 |
| ·质粒的扩大培养 | 第27-28页 |
| ·制备目的基因MT | 第28-30页 |
| ·表达载体和目的片段的连接 | 第30-31页 |
| ·重组表达载体的酶切鉴定 | 第31页 |
| 3 结果 | 第31-35页 |
| ·PCR扩增MT基因片段 | 第31-32页 |
| ·pGEM-T-MT的构建 | 第32页 |
| ·pGEM-T-MT载体双酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·pQE31-MT载体的构建 | 第33-34页 |
| ·序列测定及分析 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-36页 |
| Abstract | 第36-37页 |
| 第三章 重组表达载体pGEX-6p1-MT的构建及在大肠杆菌BL21中的表达 | 第37-51页 |
| 摘要 | 第37-38页 |
| 1 实验材料 | 第38-39页 |
| ·菌种与质粒 | 第38页 |
| ·溶液 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| 2 实验方法 | 第39-41页 |
| ·重组质粒构建流程图 | 第39-40页 |
| ·MT基因扩增 | 第40页 |
| ·MT基因T载体亚克隆和酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·pGEX-6p1-MT融合表达载体的构建 | 第41页 |
| ·含重组MT工程菌株的表达分析及条件优化 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-46页 |
| ·PCR扩增MT基因片段 | 第41页 |
| ·连接产物pGEM-T-MT与表达载体pGEX-6p-1双酶切 | 第41页 |
| ·pGEX-6p1-MT亚克隆载体的构建 | 第41-43页 |
| ·序列测定及分析 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白的表达形式 | 第44页 |
| ·金属Zn离子诱导浓度 | 第44-45页 |
| ·不同浓度IPTG诱导表达 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-49页 |
| ·金属诱导 | 第46页 |
| ·表达载体的选择 | 第46-49页 |
| 5 结论 | 第49页 |
| Abstract | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 个人简况及联系方式 | 第60-62页 |