牛无浆体病套式PCR及实时荧光PCR检测方法的建立
| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 第1章 无浆体病的研究进展 | 第11-28页 |
| ·病原体 | 第11-12页 |
| ·分类学 | 第11-12页 |
| ·形态学 | 第12页 |
| ·地理分布 | 第12-13页 |
| ·传播媒介 | 第13-14页 |
| ·流行病学 | 第14-15页 |
| ·临床症状 | 第15页 |
| ·发病机理 | 第15-16页 |
| ·诊断技术 | 第16-23页 |
| ·病原学诊断 | 第16-17页 |
| ·血清学诊断 | 第17-20页 |
| ·间接荧光抗体试验与显微荧光测定法 | 第17-18页 |
| ·快速凝集试验与补体结合试验 | 第18页 |
| ·间接荧光抗体试验 | 第18-19页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第19-20页 |
| ·其它血清学方法 | 第20页 |
| ·分子生物学检测 | 第20-23页 |
| ·核酸探针检查 | 第20-21页 |
| ·多聚酶链式反应技术 | 第21-22页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第22-23页 |
| ·无浆体病的防治 | 第23-26页 |
| ·蜱的控制 | 第23页 |
| ·无浆体疫苗的研究 | 第23-25页 |
| ·活疫苗的研究 | 第23-24页 |
| ·弱毒疫苗的研究 | 第24页 |
| ·灭活苗的研究 | 第24-25页 |
| ·重组疫苗的研究进展 | 第25页 |
| ·药物治疗 | 第25-26页 |
| ·无浆体虫株的保存方法 | 第26-27页 |
| ·无浆体的体外培养 | 第27-28页 |
| 第2章 套式PCR方法检测牛羊无浆体病 | 第28-52页 |
| ·目的和意义 | 第28页 |
| ·材料与方法 | 第28-35页 |
| ·模板 | 第28页 |
| ·样品采集 | 第28页 |
| ·供试引物 | 第28页 |
| ·主要化学试剂和药品 | 第28-30页 |
| ·仪器设备 | 第30页 |
| ·模板制备 | 第30-31页 |
| ·模板制备方法的优化 | 第31-32页 |
| ·LB培养基的制备 | 第32页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·克隆 | 第32页 |
| ·DNA浓度的测定 | 第32-33页 |
| ·PCR扩增 | 第33页 |
| ·PCR扩增条件的优化 | 第33-34页 |
| ·引物退火温度优化 | 第33页 |
| ·dNTP浓度的优化 | 第33页 |
| ·Mg~(2+)浓度的优化 | 第33页 |
| ·PCR扩增时的延伸时间的确定 | 第33-34页 |
| ·PCR反应的变性时间和退火时间 | 第34页 |
| ·常规PCR的灵敏度(以基因组DNA为模板) | 第34页 |
| ·套式PCR的灵敏度(以质粒DNA为模板) | 第34页 |
| ·套式PCR的特异性 | 第34页 |
| ·PCR产物克隆测序 | 第34页 |
| ·套式PCR循环数的确定 | 第34-35页 |
| ·对照实验 | 第35页 |
| ·样品检测 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-49页 |
| ·不同DNA抽提方法的比较 | 第35页 |
| ·PCR反应条件优化结果 | 第35-40页 |
| ·引物退火温度优化结果 | 第35-37页 |
| ·dNTP浓度的优化结果 | 第37页 |
| ·Mg~(2+)浓度的优化结果 | 第37-38页 |
| ·PCR扩增时的延伸时间优化结果 | 第38-39页 |
| ·变性时间和退火时间 | 第39-40页 |
| ·常规PCR引物的灵敏度 | 第40-43页 |
| ·套式PCR引物的灵敏度(以质粒DNA为模板) | 第43-45页 |
| ·引物特异性 | 第45-47页 |
| ·套式PCR循环数优化结果 | 第47-48页 |
| ·样品检测及PCR产物克隆测序结果 | 第48-49页 |
| ·不同检测方法比较结果 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-52页 |
| 第3章 实时荧光PCR检测牛边缘无浆体病 | 第52-57页 |
| ·目的和意义 | 第52页 |
| ·材料与方法 | 第52-54页 |
| ·模板的制备 | 第52页 |
| ·样品的采集 | 第52-53页 |
| ·引物和探针 | 第53页 |
| ·实时荧光PCR | 第53页 |
| ·灵敏度试验 | 第53-54页 |
| ·特异性试验 | 第54页 |
| ·样品的实时荧光PCR检测 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-56页 |
| ·实时荧光PCR特异性 | 第54页 |
| ·实时荧光PCR扩增的灵敏度 | 第54-55页 |
| ·样品DNA的实时荧光PCR扩增 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-67页 |
| 附录1 试剂配制 | 第67-70页 |
| 附录2 测序结果比对 | 第70-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
