中文摘要 | 第1-4页 |
英文摘要 | 第4-6页 |
略缩语表 | 第6-13页 |
第一章 鱼类的特异性免疫系统:综述 | 第13-35页 |
1 免疫组织与器官 | 第13-19页 |
·胸腺(Thymus) | 第13-15页 |
·头肾(Head kidney) | 第15-16页 |
·脾脏(Spleen) | 第16-17页 |
·粘膜相关淋巴组织(Mucosa-associated lymphoid tissue, MALT) | 第17-19页 |
2 淋巴细胞 | 第19-25页 |
·鱼类淋巴细胞的系统发育 | 第19-21页 |
·鱼类B细胞的个体发生 | 第21-23页 |
·鱼类T细胞的个体发生 | 第23-25页 |
3 免疫球蛋白和T细胞受体 | 第25-34页 |
·免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig) | 第26-30页 |
·免疫球蛋白的基因组结构 | 第26-29页 |
·免疫球蛋白的表达 | 第29-30页 |
·T细胞抗原受体(T cell receptor, TCR) | 第30-34页 |
·硬骨鱼类TCR的基因结构 | 第31-32页 |
·硬骨鱼类TCR基因组分析 | 第32-33页 |
·硬骨鱼类TCR的系统发育分析 | 第33-34页 |
4 本研究的目的 | 第34-35页 |
第二章 原位杂交检测鳜B细胞的发生与分布 | 第35-54页 |
1 前言 | 第35-36页 |
2 材料与方法 | 第36-43页 |
·所需试剂和溶液的配置 | 第36-37页 |
·样品采集 | 第37页 |
·组织固定 | 第37-38页 |
·原位杂交 | 第38-43页 |
3 结果 | 第43-51页 |
·鳜体长的变化 | 第43-44页 |
·探针cDNA片段的扩增 | 第44页 |
·质粒的鉴定与酶切 | 第44-45页 |
·探针标记效率的检测 | 第45页 |
·头肾中IgM阳性细胞的发育 | 第45-47页 |
·脾脏中IgM阳性细胞的发育 | 第47-48页 |
·胸腺中IgM阳性细胞的发育 | 第48-49页 |
·粘膜相关淋巴组织中B细胞的发育 | 第49-51页 |
4 讨论 | 第51-54页 |
第三章 IgM, IgD, IgZ在鳜成鱼淋巴组织中的表达 | 第54-64页 |
1 前言 | 第54-55页 |
2 材料与方法 | 第55-56页 |
·组织处理 | 第55页 |
·探针制备 | 第55页 |
·杂交 | 第55页 |
·信号放大 | 第55-56页 |
3 结果 | 第56-62页 |
·探针cDNA片段的扩增 | 第56页 |
·质粒的鉴定与酶切 | 第56-57页 |
·探针标记效率 | 第57页 |
·IgM阳性细胞在组织中的分布 | 第57-58页 |
·IgD阳性细胞在组织中的分布 | 第58页 |
·IgZ阳性细胞在组织中的分布 | 第58-62页 |
4 讨论 | 第62-64页 |
第四章 实时荧光定量PCR检测鳜注射灭活柱状黄杆菌后体内IgM, IgD,IgZ的表达变化情况 | 第64-79页 |
1 前言 | 第64-65页 |
2 材料与方法 | 第65-70页 |
·实验鱼 | 第65页 |
·细菌 | 第65页 |
·免疫注射 | 第65-66页 |
·样品采集 | 第66页 |
·RNA的提取 | 第66页 |
·RNA样品中DNA的处理 | 第66-67页 |
·cDNA模板的准备 | 第67页 |
·实时荧光定量PCR | 第67-70页 |
3. 结果 | 第70-77页 |
·RNA样品质量的检测 | 第70-71页 |
·目的片段的扩增 | 第71页 |
·质粒的提取 | 第71-72页 |
·标准曲线的建立 | 第72页 |
·IgM表达的变化 | 第72-74页 |
·IgD表达的变化 | 第74页 |
·IgZ表达的变化 | 第74-77页 |
4. 讨论 | 第77-79页 |
第五章 鳜T细胞受体(TCR)α, β, γ链基因片段的分子克隆及表达分析 | 第79-106页 |
1 前言 | 第79-80页 |
2 材料与方法 | 第80-84页 |
·基因分离 | 第80-83页 |
·RNA 提取 | 第80页 |
·SMART cDNA第一链的合成 | 第80-81页 |
·TCR基因片段的扩增 | 第81页 |
·RACE-PCR | 第81页 |
·TCR基因cDNA序列的分析及系统进化树的构建 | 第81-82页 |
·TCR基因在不同组织中的表达 | 第82-83页 |
·实时荧光定量PCR分析TCR α、γ基因在鳜注射前后的表达变化 | 第83-84页 |
3 结果 | 第84-102页 |
·TCR cDNA序列及推导的氨基酸序列 | 第84-87页 |
·TCR基因的结构及多序列比对分析 | 第87-94页 |
·TCR基因恒定区的系统树构建 | 第94-97页 |
·鳜各组织中TCR基因的mRNA转录水平 | 第97-98页 |
·实时荧光定量PCR扩增效率的检测 | 第98-99页 |
·注射细菌的鳜体内TCRα的表达变化 | 第99页 |
·注射细菌的鳜体内TCRγ的表达变化 | 第99-102页 |
4 讨论 | 第102-106页 |
参考文献 | 第106-133页 |
附录 | 第133-134页 |
致谢 | 第134页 |