| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-15页 |
| 符号及缩略语 | 第15-17页 |
| 前言 | 第17-19页 |
| 第一部分 文献综述 | 第19-61页 |
| 第一章 我国罗非鱼的养殖现状及存在的问題 | 第21-27页 |
| 1 罗非鱼的分类与分布 | 第21页 |
| 2 我国罗非鱼养殖的历史及现状 | 第21-24页 |
| 3 我国罗非鱼养殖的重要意义 | 第24页 |
| 4 我国罗非鱼养殖中存在的问题及解决办法 | 第24-27页 |
| ·不耐低温 | 第24-25页 |
| ·繁殖过快 | 第25页 |
| ·种质极易混杂 | 第25页 |
| ·雄性率不能达到100% | 第25-27页 |
| 第二章 性别决定与性别分化机制 | 第27-37页 |
| 1 性别决定与性别分化的分子机制 | 第27-35页 |
| ·性别决定的分子机理 | 第27-28页 |
| ·参与性别决定与性别分化的基因 | 第28-35页 |
| 2 性别决定与性别分化的研究方法 | 第35-37页 |
| ·模式生物的选择 | 第35页 |
| ·组织学观察性腺发育过程 | 第35页 |
| ·突变分析 | 第35页 |
| ·时空表达 | 第35-37页 |
| 第三章 鱼类的性别决定与性别分化研究进展 | 第37-53页 |
| 1 鱼类性别决定的遗传学基础 | 第37-46页 |
| ·鱼类性别决定的细胞遗传学基础研究现状 | 第37-43页 |
| ·鱼类性别决定的分子遗传学研究概况 | 第43-46页 |
| 2 环境因子与鱼类性别决定 | 第46-48页 |
| ·温度的影响 | 第46-47页 |
| ·外源激素的影响 | 第47-48页 |
| ·其它因素的影响 | 第48页 |
| 3 鱼类性别控制 | 第48-53页 |
| ·鱼类性别控制的意义 | 第49页 |
| ·鱼类性别人工控制的方法 | 第49-53页 |
| 第四章 鱼类DMRT基因的研究进展 | 第53-61页 |
| 1 性别决定相关基因的进化 | 第53-54页 |
| 2 DMRT基因家族的发现 | 第54-55页 |
| 3 DMRT基因家族聚类分析 | 第55-57页 |
| 4 DM基因家族的保守同线性 | 第57-59页 |
| 5 鱼类DMRT基因的研究进展 | 第59-61页 |
| 第二部分 试验研究 | 第61-135页 |
| 第五章 奥利亚罗非鱼DMO和DMT基因的克隆与序列分析 | 第63-97页 |
| 1 实验材料 | 第65-67页 |
| ·实验动物 | 第65页 |
| ·主要试剂 | 第65页 |
| ·菌种和载体 | 第65页 |
| ·主要仪器 | 第65页 |
| ·引物设计与合成 | 第65-67页 |
| 2 实验方法 | 第67-75页 |
| ·奥利亚罗非鱼总RNA的提取 | 第67页 |
| ·罗非鱼血液DNA的提取 | 第67-68页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第68页 |
| ·奥利亚罗非鱼总RNA的反转录 | 第68页 |
| ·套式PCR扩增DM-domain区域 | 第68-69页 |
| ·RACE扩增 | 第69-71页 |
| ·RACE产物的克隆和鉴定 | 第71-74页 |
| ·DMO和DMT基因的克隆及鉴定 | 第74页 |
| ·序列测定及分析 | 第74-75页 |
| 3 实验结果 | 第75-94页 |
| ·奥利亚罗非鱼基因组DNA的提取 | 第75页 |
| ·奥利亚罗非鱼卵巢和精巢cDNA的合成 | 第75-76页 |
| ·DM-domain区的扩增 | 第76-77页 |
| ·奥利亚罗非鱼DMO基因的3’RACE和5’RACE | 第77-78页 |
| ·奥利亚罗非鱼DMT基因的3’RACE和5’RACE | 第78-79页 |
| ·奥利亚罗非鱼DMO及DMT基因的序列分析 | 第79-85页 |
| ·奥利亚罗非鱼DMO及DMT的蛋白质结构预测 | 第85-94页 |
| 4 讨论 | 第94-97页 |
| ·DM-domain的保守性 | 第94-95页 |
| ·奥利亚罗非鱼DMO和DMT基因的序列分析 | 第95页 |
| ·奥利亚罗非鱼DMO和DMT基因的二级结构分析 | 第95-96页 |
| ·奥利亚罗非鱼DMO和DMT基因的B细胞表位分析 | 第96-97页 |
| 第六章 奥利亚罗非鱼DMO和DMT基因的表达特征 | 第97-107页 |
| 1 实验材料 | 第99页 |
| ·实验动物 | 第99页 |
| ·主要试剂 | 第99页 |
| ·主要仪器 | 第99页 |
| ·引物设计与合成 | 第99页 |
| 2 实验方法 | 第99-101页 |
| ·试验分组及样品收集 | 第99-100页 |
| ·RNA抽提及纯度鉴定 | 第100页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR | 第100-101页 |
| 3 实验结果 | 第101-104页 |
| ·RNA纯度和完整性 | 第101页 |
| ·奥利亚罗非鱼鱼苗群体性比测定 | 第101页 |
| ·不同激素组仔鱼DMO的相对表达量 | 第101-102页 |
| ·不同激素组仔鱼DMT的相对表达量 | 第102-104页 |
| 4 讨论 | 第104-107页 |
| ·奥利亚罗非鱼DMO和DMT基因的组织表达特异性 | 第104页 |
| ·奥利亚罗非鱼DMO和DMT基因在不同发育期的表达 | 第104-105页 |
| ·激素对奥利亚罗非鱼DMO和DMT mRNA表达水平的影响 | 第105-107页 |
| 第七章 奥利亚罗非鱼DMO和DMT mRNA原位杂交 | 第107-117页 |
| 1 实验材料 | 第108页 |
| ·实验动物 | 第108页 |
| ·主要试剂 | 第108页 |
| ·主要仪器 | 第108页 |
| 2 实验方法 | 第108-114页 |
| ·取材 | 第108-109页 |
| ·原位杂交(InsituHybridization,ISH) | 第109-114页 |
| 3 实验结果 | 第114-115页 |
| ·DMO和DMT mRNA原位杂交检测结果 | 第114-115页 |
| 4 讨论 | 第115-117页 |
| 第八章 奥利亚罗非鱼DMO和DMT抗体制备及组织表达谱分析 | 第117-135页 |
| 1 实验材料 | 第118-119页 |
| ·菌株及载体 | 第118页 |
| ·主要试剂 | 第118-119页 |
| ·主要仪器 | 第119页 |
| 2 实验方法 | 第119-124页 |
| ·DMO和DMT基因编码区的克隆 | 第119页 |
| ·重组质粒pGEM-T/DMO和pGEM-T/DMT的构建 | 第119-120页 |
| ·pMAL-c2x/DMO和pMAL-c2x/DMT原核表达系统的构建 | 第120-121页 |
| ·pMAL-c2x/DMO和pMAL-c2x/DMT的原核表达 | 第121-122页 |
| ·抗DMO和抗DMT多克隆抗体的制备、纯化与鉴定 | 第122页 |
| ·奥利亚罗非鱼DMO和DM7蛋白的Westernblot分析 | 第122-124页 |
| ·免疫组织化学 | 第124页 |
| 3 实验结果 | 第124-131页 |
| ·重组质粒pGEM-T/DMO和pGEM-T/DMT的构建 | 第124-125页 |
| ·pMAL-c2x/DMO和pMAL-c2x/DMT原核表达系统的构建与鉴定 | 第125-126页 |
| ·融合蛋白的诱导表达与SDS-PAGE电泳分析 | 第126-127页 |
| ·表达产物的Westernblot分析 | 第127-128页 |
| ·表达产物的酶切与纯化 | 第128页 |
| ·多克隆抗体的制备与检测 | 第128-129页 |
| ·奥利亚罗非鱼DMO和DMT蛋白表达情况 | 第129-130页 |
| ·DMO和DMT免疫组织化学检测结果 | 第130-131页 |
| 4 讨论 | 第131-135页 |
| ·基因在大肠杆菌系统中翻译效率的优化 | 第131页 |
| ·原核表达及多克隆抗体的制备 | 第131-132页 |
| ·奧利亚罗非鱼DMO和DMT的表达与功能 | 第132-135页 |
| 全文结论 | 第135-137页 |
| 参考文献 | 第137-153页 |
| 本研究的创新点及展望 | 第153-155页 |
| 附录一 常用试剂配制一览表 | 第155-161页 |
| 附录二 载体图谱及序列 | 第161-163页 |
| 附录三 攻读博士学位期间发表的论文及参与课题 | 第163-165页 |
| 致谢 | 第165页 |
