| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 引言 | 第13-18页 |
| 第一章 实验材料 | 第18-24页 |
| ·菌株和质粒 | 第18页 |
| ·工具酶、抗体及分子量标准 | 第18页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第18-19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·主要培养基 | 第20-21页 |
| ·主要溶液 | 第21-24页 |
| 第二章 实验方法 | 第24-36页 |
| ·敲除质粒的构建 | 第24-27页 |
| ·基因的克隆 | 第24-25页 |
| ·构建敲除质粒pGE1205 | 第25-27页 |
| ·毕赤酵母中OCH1基因的敲除 | 第27-29页 |
| ·一次重组敲入质粒pGE1205 | 第27-28页 |
| ·二次重组敲除OCH1基因 | 第28页 |
| ·OCH1基因敲除菌的PCR鉴定 | 第28-29页 |
| ·GM-CSF基因的克隆 | 第29-30页 |
| ·HSA/GM-CSF表达载体的构建 | 第30-31页 |
| ·pHIL-D2/HSA/GM-CSF表达载体的构建 | 第30-31页 |
| ·pHIL-D2/HSA/GM-CSF-HIS表达载体的构建 | 第31页 |
| ·HSA/GM-CSF在毕赤酵母GS115中的表达和鉴定 | 第31-32页 |
| ·HSA/GM-CSF在毕赤酵母GS115中的表达 | 第31-32页 |
| ·表达产物的检测 | 第32页 |
| ·HSA/GM-CSF在毕赤酵母OCH1基因敲除菌中的表达和鉴定 | 第32-33页 |
| ·HSA/GM-CSF在毕赤酵母GJK01中的表达 | 第32页 |
| ·表达产物的检测 | 第32-33页 |
| ·融合蛋白HSA/GM-CSF的纯化 | 第33-34页 |
| ·HSA/GM-CSF的纯化 | 第33页 |
| ·HSA/GM-CSF-HIS的纯化 | 第33-34页 |
| ·纯化后的蛋白浓度的测定 | 第34页 |
| ·HSA/GM-CSF的活性分析 | 第34-35页 |
| ·HSA/GM-CSF融合蛋白N-糖链的FACE分析 | 第35-36页 |
| ·寡糖分子量标准的制作 | 第35页 |
| ·HSA/GM-CSF融合蛋白N-糖链样品的制备 | 第35页 |
| ·HSA/GM-CSF融合蛋白N-糖链样品的标记 | 第35页 |
| ·HSA/GM-CSF融合蛋白N-糖链FACE分析 | 第35-36页 |
| 第三章 实验结果 | 第36-48页 |
| ·敲除质粒的构建 | 第36-37页 |
| ·基因的克隆 | 第36页 |
| ·敲除质粒pGE1205的构建 | 第36-37页 |
| ·OCH1基因敲除的毕赤酵母菌株构建 | 第37-39页 |
| ·一次重组敲入质粒pGE1205 | 第37页 |
| ·二次重组敲除OCH1基因 | 第37-38页 |
| ·OCH1基因敲除菌的PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·GM-CSF基因的克隆 | 第39-40页 |
| ·表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·HSA/GM-CSF在毕赤酵母中的表达 | 第41-42页 |
| ·OCH1基因的敲除对HSA/GM-CSF糖基化的影响 | 第42-43页 |
| ·表达产物的检测 | 第42页 |
| ·经PNGaseF酶切后表达产物的SDS-PAGE检测 | 第42-43页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| ·融合蛋白浓度的测定 | 第44-45页 |
| ·活性分析 | 第45-46页 |
| ·GM-CSF融合蛋白的N-糖链的FACE分析 | 第46-48页 |
| 第四章 讨论 | 第48-51页 |
| 第五章 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介(含发表文章目录) | 第55页 |
