| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 文章综述 | 第15-25页 |
| 1 WSSV 分子致病机制的研究进展 | 第15-17页 |
| ·WSSV 的生物学特征 | 第15-16页 |
| ·囊膜蛋白在WSSV 侵染中的作用 | 第16-17页 |
| ·非结构蛋白在WSSV 侵染中的作用 | 第17页 |
| 2 F1F0-ATP synthase 研究进展 | 第17-19页 |
| ·F1F0-ATP synthase 组成及分布 | 第17-18页 |
| ·异位F1F0-ATP synthase 作为受体参与的一些生物学现象 | 第18-19页 |
| ·血管生成抑制素 | 第18页 |
| ·脂类代谢 | 第18-19页 |
| 3 虾造血激素的研究现状 | 第19页 |
| 4 展望 | 第19-20页 |
| 参考文献 | 第20-25页 |
| 第二章 凡纳滨对虾的造血激素(astakine)全长cDNA 的克隆与序列分析 | 第25-38页 |
| 1 材料 | 第25页 |
| ·对虾 | 第25页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-28页 |
| ·引物的设计与合成 | 第25-26页 |
| ·对虾鳃总RNA 的提取和cDNA 第一链的合成 | 第26-28页 |
| ·总RNA 的提取 | 第26页 |
| ·DNase I 消化 | 第26-27页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第27页 |
| ·3’RACE | 第27页 |
| ·5’RACE | 第27-28页 |
| ·凡纳滨对虾造血激素全长cDNA 序列分析及氨基酸分析 | 第28页 |
| 3 结果 | 第28-35页 |
| ·总RNA 的提取 | 第28-29页 |
| ·3’RACE | 第29页 |
| ·5’RACE | 第29-30页 |
| ·凡纳滨对虾造血激素基因序列特征 | 第30-31页 |
| ·凡纳滨对虾造血激素(LvAST)蛋白结构特征分析 | 第31-32页 |
| ·虾造血激素基因及其同源基因的分子系统学分析 | 第32-33页 |
| ·不同种类造血激素蛋白保守性分析 | 第33-35页 |
| 4 讨论 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-38页 |
| 第三章 凡纳滨对虾造血激素蛋白(LVAST)的原核表达，鉴定及纯化 | 第38-53页 |
| 1 构建原核表达重组载体 | 第38-42页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·质粒和菌种 | 第38页 |
| ·主要设备及实验试剂 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-42页 |
| ·引物设计及合成 | 第38-39页 |
| ·pBAD/gIIIA 质粒的提取 | 第39页 |
| ·凡纳滨对虾造血激素的扩增与纯化 | 第39-40页 |
| ·pBAD/gIIIA 质粒与凡纳滨对虾造血激素基因的双酶切 | 第40-41页 |
| ·质粒重组 | 第41页 |
| ·大肠杆菌TOP10 化转 | 第41页 |
| ·重组菌的鉴别 | 第41-42页 |
| 2 阳性目的单克隆的诱导表达、鉴定及纯化 | 第42-46页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·菌种 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42页 |
| ·主要实验设备 | 第42-43页 |
| ·方法 | 第43-46页 |
| ·重组菌的L-阿拉伯糖诱导表达与鉴定 | 第43-44页 |
| ·造血激素蛋白的Western-blot 分析 | 第44-45页 |
| ·重组LVAST 的纯化 | 第45-46页 |
| ·重组LVAST 的Bradford 法定量 | 第46页 |
| 3 抗体制备 | 第46页 |
| 4 结果 | 第46-52页 |
| ·LVAST 及重组LVAST 的生物信息学分析 | 第46-48页 |
| ·质粒与目的片段造血激素的制备 | 第48-49页 |
| ·重组克隆的菌落PCR 检测与DNA 测序 | 第49-50页 |
| ·L-阿拉伯糖诱导重组表达及SDS-PAGE 和Western-blot 分析 | 第50-51页 |
| ·重组造血激素蛋白的纯化和复性 | 第51页 |
| ·纯化后的重组造血激素蛋白定量 | 第51-52页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第52页 |
| 5 讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 三种蛋白 BP53、LVAST 和 WSSV-VP37 的结合性分析 | 第53-64页 |
| 1 材料和试剂 | 第53-55页 |
| ·菌种和蛋白 | 第53页 |
| ·主要实验试剂和实验设备 | 第53-55页 |
| 2 方法 | 第55-59页 |
| ·BP53 和VP37 蛋白的诱导和纯化 | 第55页 |
| ·ELISA 分析BP53 与LVAST、VP37 的结合 | 第55-57页 |
| ·ELISA 检验VP37 与LVAST 的结合 | 第55-56页 |
| ·ELISA 检验LVAST 与BP53 的结合 | 第56页 |
| ·ELISA 检验VP37 与BP53 的结合 | 第56页 |
| ·竞争ELISA 分析BP53 与LVAST、VP37 的结合 | 第56-57页 |
| ·Dynabeads 磁珠鉴定BP53 与LVAST、VP37 的结合 | 第57-59页 |
| ·偶联配体、结合BP53 蛋白 | 第57-58页 |
| ·结合蛋白 | 第58-59页 |
| 3 结果 | 第59-62页 |
| ·ELISA 检验VP37 与LVAST 的结合 | 第59页 |
| ·ELISA 检验LVAST 与BP53 的结合 | 第59-60页 |
| ·ELISA 检验VP37 与BP53 的结合 | 第60-61页 |
| ·竞争ELISA 分析BP53 与LVAST、VP37 的结合 | 第61页 |
| ·Dynabeads 磁珠鉴定BP53 与LVAST、VP37 的结合 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| 第五章 LVAST 对凡纳滨对虾抗 WSSV 感染力的影响研究 | 第64-67页 |
| 1 材料 | 第64页 |
| ·对虾 | 第64页 |
| ·其他 | 第64页 |
| 2 方法 | 第64-65页 |
| 3 结果 | 第65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 第六章 RNAi 结合实时荧光定量 PCR 分析造血激素对 WSSV 复制的的影响 | 第67-81页 |
| 1 材料与仪器 | 第67-68页 |
| ·对虾和质粒 | 第67-68页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第68页 |
| 2 方法 | 第68-76页 |
| ·体外合成ds RNA | 第68-71页 |
| ·PEGFP-N 1 空质粒和pBAD | 第69页 |
| ·制备合成dsRNA 所需的双链DNA 模板 | 第69-70页 |
| ·体外合成ds RNA PCR 反应体系(20 μl) | 第70页 |
| ·体外合成ds RNA PCR 反应程序 | 第70-71页 |
| ·RNAi 效果评估 | 第71-73页 |
| ·血淋巴RNA 的提取 | 第71-72页 |
| ·一步RT-PCR 法检测lvast 的转录水平 | 第72-73页 |
| ·lvast - dsRNA 对凡纳滨对虾抗WSSV 感染力的影响 | 第73页 |
| ·RNAi 结合实时荧光定量 PCR 分析造血激素对 WSSV 复制的影响 | 第73-76页 |
| ·内参选择 | 第73页 |
| ·引物设计 | 第73-74页 |
| ·注射试验 | 第74页 |
| ·样品制备 | 第74-75页 |
| ·荧光定量PCR 分析 | 第75-76页 |
| 3 结果 | 第76-80页 |
| ·合成dsRNA 所需的双链DNA 模板 | 第76-77页 |
| ·RNAi 效果评估 | 第77-78页 |
| ·lvast - dsRNA 对凡纳滨对虾抗WSSV 感染力的影响 | 第78页 |
| ·RNAi 结合实时荧光定量PCR 分析造血激素对WSSV 复制的影响 | 第78-80页 |
| 4 讨论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-82页 |
| 个人简历 | 第82页 |
| 发表文章目录 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
