| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 1 引言 | 第11-25页 |
| ·钙调蛋白 | 第11-19页 |
| ·钙离子结合蛋白的种类 | 第11-12页 |
| ·钙-钙离子结合蛋白信号传导系统及其功能 | 第12-14页 |
| ·钙作为植物信号转导中第二信使的作用 | 第12页 |
| ·钙-钙调蛋白信号系统的主要作用方式 | 第12-13页 |
| ·钙调蛋白的表达特点 | 第13-14页 |
| ·钙调蛋白的功能 | 第14-19页 |
| ·作为第二信使的功能 | 第14-16页 |
| ·作为酶的反应器 | 第16-17页 |
| ·在植物生长发育调控中的作用 | 第17-19页 |
| ·参与离子转运通道和膜蛋白的功能 | 第19页 |
| ·热激蛋白 | 第19-24页 |
| ·热激蛋白的分类 | 第20-22页 |
| ·HSP110 | 第20页 |
| ·HSP90 | 第20页 |
| ·HSP70 | 第20-21页 |
| ·HSP60 | 第21页 |
| ·小分子量HSP(sHSPs) | 第21-22页 |
| ·热激蛋白的作用 | 第22-24页 |
| ·钙调蛋白和热激蛋白相互作用 | 第24页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 2 钙调蛋白基因的克隆 | 第25-38页 |
| ·小麦和绿豆钙调蛋白基因的克隆 | 第25-33页 |
| ·材料与方法 | 第25-28页 |
| ·材料与试剂 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-28页 |
| ·小麦和绿豆总RNA的提取 | 第26-28页 |
| ·植物总RNA电泳检测和紫外分光光度法检测 | 第28页 |
| ·RT-PCR | 第28-29页 |
| ·RNA的反转录 | 第28-29页 |
| ·PCR扩增 | 第29页 |
| ·PCR产物与T载体的连接 | 第29-32页 |
| ·目的片断的回收 | 第29-30页 |
| ·回收片断与T载体的连接 | 第30页 |
| ·制备大肠杆菌感受态细胞 | 第30-31页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第31页 |
| ·转化后的阳性克隆的检测 | 第31-32页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第31-32页 |
| ·阳性克隆的检测 | 第32页 |
| ·PCR产物测序 | 第32-33页 |
| ·序列分析 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-38页 |
| ·总RNA提取 | 第33-34页 |
| ·PCR产物检测 | 第34页 |
| ·PCR鉴定阳性克隆 | 第34页 |
| ·绿豆钙调蛋白基因序列及其推导出的蛋白质序列 | 第34-35页 |
| ·小麦钙调蛋白基因序列及其推导出的蛋白质序列 | 第35-38页 |
| 3 植物钙调蛋白基因正、反义表达载体的构建及转化 | 第38-44页 |
| ·材料和试剂 | 第38-39页 |
| ·菌株和载体 | 第38页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第38-39页 |
| ·实验所需仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-43页 |
| ·酶切位点的选择 | 第39-40页 |
| ·双酶切克隆载体及表达载体 | 第40页 |
| ·目的片断的回收 | 第40页 |
| ·目的基因和植物表达载体的连接 | 第40-41页 |
| ·连接产物的转化 | 第41页 |
| ·正、反义表达载体的阳性克隆 | 第41页 |
| ·构建好的表达载体的酶切检测和PCR验证 | 第41-42页 |
| ·植物表达载体质粒的提取 | 第42页 |
| ·制备农杆菌感受态细胞 | 第42-43页 |
| ·正、反义表达载体转化农杆菌感受态细胞 | 第43页 |
| ·PCR法鉴定农杆菌阳性菌落 | 第43页 |
| ·结果 | 第43页 |
| ·酶切鉴定结果 | 第43页 |
| ·PCR检测结果 | 第43页 |
| ·钙调蛋白基因的转化 | 第43-44页 |
| ·材料和试剂 | 第43-44页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44页 |
| ·结果 | 第44页 |
| 4 油菜热激蛋白基因的克隆 | 第44-49页 |
| ·材料和试剂 | 第45-46页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-46页 |
| ·油菜总RNA的提取 | 第45页 |
| ·RT-PCR | 第45页 |
| ·PCR产物与T载体的连接 | 第45页 |
| ·制备大肠杆菌感受态细胞 | 第45-46页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第46页 |
| ·转化后的阳性克隆的检测 | 第46页 |
| ·阳性克隆的检测 | 第46页 |
| ·PCR产物测序 | 第46页 |
| ·序列分析与结果 | 第46-49页 |
| 5 讨论 | 第49-60页 |
| ·钙调蛋白基因分析 | 第49-55页 |
| ·钙调蛋白基因核苷酸序列分析 | 第49-50页 |
| ·钙调蛋白基因编码的氨基酸序列分析 | 第50-52页 |
| ·钙调蛋白氨基酸序列中EF－hand结构分析 | 第52-53页 |
| ·不同植物钙调蛋白基因之间的核苷酸和氨基酸序列的比较 | 第53页 |
| ·不同植物钙调蛋白的氨基酸密码子使用频率比较 | 第53页 |
| ·钙调蛋白疏水性和亲水性分析 | 第53-54页 |
| ·钙调蛋白的生物信息学分析 | 第54-55页 |
| ·提取植物总RNA的不同方法比较 | 第55-56页 |
| ·RT-PCR扩增目的基因 | 第56-57页 |
| ·正、反义表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·钙调蛋白基因转化丹参 | 第58-59页 |
| ·筛选剂的选择 | 第58页 |
| ·受体材料的选择 | 第58页 |
| ·共培养时间对转化的影响 | 第58-59页 |
| ·热激蛋白基因片段分析 | 第59-60页 |
| ·热激蛋白基因核苷酸序列及氨基酸序列分析 | 第59页 |
| ·热激蛋白疏水性和亲水性分析 | 第59-60页 |
| 总结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第68页 |