| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| ·细菌耐药性检测方法的研究现况 | 第12-13页 |
| ·PCR检测试剂盒的研究现况 | 第13-14页 |
| ·细菌对氨基糖苷类药物耐药情况的研究 | 第14-19页 |
| ·本研究的前期工作基础 | 第19页 |
| ·本研究的目的意义及创新点 | 第19-20页 |
| ·本研究的技术路线 | 第20页 |
| 2 试验材料 | 第20-21页 |
| ·试验菌株 | 第20-21页 |
| ·试验试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| 3 试验方法 | 第21-29页 |
| ·样品的采集 | 第21页 |
| ·细菌分离纯化及生化鉴定 | 第21-22页 |
| ·目的基因的选择及四重PCR引物设计 | 第22-23页 |
| ·PCR扩增模板制备 | 第23页 |
| ·单基因PCR扩增体系及其可变范围的确立 | 第23页 |
| ·目的耐药基因的测序 | 第23页 |
| ·四重PCR反应体系的初步建立 | 第23-24页 |
| ·四重PCR反应体系的优化 | 第24-25页 |
| ·PCR模板制备方法的选择 | 第25-26页 |
| ·四重PCR模板的优化 | 第26页 |
| ·试剂盒特异性试验 | 第26-27页 |
| ·试剂盒灵敏度试验 | 第27页 |
| ·试剂盒重复性试验 | 第27页 |
| ·试剂盒保存期试验 | 第27-28页 |
| ·试剂盒检测与药敏试验方法的比较 | 第28-29页 |
| ·试剂盒的组装 | 第29页 |
| ·试剂盒在检测全国484株细菌中的应用 | 第29页 |
| ·试剂盒在检测大熊猫肠道分离菌中的应用 | 第29页 |
| ·试剂盒操作规程草案的编制依据 | 第29页 |
| 4 试验结果 | 第29-46页 |
| ·样品采集及细菌的分离纯化鉴定结果 | 第29-30页 |
| ·目的基因的选择及四重PCR引物设计结果 | 第30-31页 |
| ·单基因PCR最佳扩增参数及其可变范围结果 | 第31-32页 |
| ·阳性菌株中目的耐药基因序列分析 | 第32-35页 |
| ·四重PCR反应体系的初步建立结果 | 第35-36页 |
| ·四重PCR反应体系的优化结果 | 第36-39页 |
| ·PCR模板制备方法的选择结果 | 第39页 |
| ·PCR模板制备方法的优化结果 | 第39-40页 |
| ·试剂盒特异性试验结果 | 第40-41页 |
| ·试剂盒灵敏度试验结果 | 第41页 |
| ·试剂盒重复性试验结果 | 第41-42页 |
| ·试剂盒保存期试验结果 | 第42页 |
| ·试剂盒检测与药敏试验方法的比较结果 | 第42-44页 |
| ·试剂盒的外包装 | 第44页 |
| ·试剂盒在检测全国484份样品中的应用结果 | 第44-45页 |
| ·本试剂盒在检测大熊猫肠道分离细菌中的应用结果 | 第45-46页 |
| ·试剂盒操作规程草案 | 第46页 |
| 5 分析与讨论 | 第46-52页 |
| ·耐药基因的PCR检测技术 | 第46-47页 |
| ·扩增目的耐药基因的选择 | 第47页 |
| ·多重PCR反应目的片段选择及引物设计原则 | 第47页 |
| ·PCR反应模板制备方法的筛选与优化 | 第47-48页 |
| ·多重PCR反应方法建立和优化的影响因素 | 第48-50页 |
| ·影响试剂盒性能的其他因素 | 第50-51页 |
| ·试剂盒保存期的影响因素 | 第51页 |
| ·耐药基因检出率与耐药表型的符合性 | 第51页 |
| ·关于我国各个省市分离菌中氨基糖苷类耐药基因检出率 | 第51-52页 |
| 6 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 附件 | 第59-67页 |
| 附件1 细菌氨基糖苷类药物耐药基因四重PCR检测试剂盒操作规程草案 | 第59-66页 |
| 附件2 试剂盒可能出现的问题及解决方案 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第67页 |