| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-19页 |
| 论文创新点和研究意义 | 第19-20页 |
| 前言 | 第20-22页 |
| 第一章 淫羊藿素及去甲淫羊藿素雌激素样活性及作用机制研究 | 第22-36页 |
| 引言 | 第22-23页 |
| 一、实验仪器与材料 | 第23-24页 |
| 二、实验方法 | 第24-28页 |
| (一)MCF-7细胞常规培养 | 第24页 |
| (二)去激素血清的制备 | 第24-25页 |
| (三)E-SCREEN法检测雌激素样活性 | 第25页 |
| (四)雌激素受体完全拮抗剂对药物促增殖作用的拮抗作用 | 第25页 |
| (五)流式细胞术检测MCF-7细胞周期的变化 | 第25-26页 |
| (六)RT-PCR检测雌激素效应基因表达水平的变化 | 第26-28页 |
| 三、实验结果 | 第28-34页 |
| (一)淫羊藿素和去甲淫羊藿素对MCF-7细胞的促增殖作用 | 第28-29页 |
| (二)ICI182,780对ICT及DICT促MCF-7细胞促增殖活性的阻断作用 | 第29-31页 |
| (三)淫羊藿素和去甲淫羊藿素对MCF-7细胞周期的影响 | 第31-32页 |
| (四)淫羊藿素和去甲淫羊藿素对雌激素效应基因表达的影响 | 第32-34页 |
| 四、讨论 | 第34-36页 |
| 第二章 异戊烯基黄酮类衍生物雌激素样活性构效关系研究及机制探讨 | 第36-47页 |
| 引言 | 第36页 |
| 一、实验材料 | 第36页 |
| 二、实验方法 | 第36-37页 |
| (一)细胞增殖测定、细胞周期分析、基因表达检测方法同第一部分 | 第36页 |
| (二)Western Blot检测PgR蛋白 | 第36-37页 |
| (三)计算机辅助构效关系研究 | 第37页 |
| 三、实验结果 | 第37-44页 |
| (一)淫羊藿素衍生物雌激素样活性及ICI 182,780的拮抗作用 | 第37-41页 |
| (二)异补骨脂黄酮对MCF-7细胞周期的影响 | 第41页 |
| (三)异补骨脂黄酮对MCF-7细胞雌激素效应基因和蛋白表达的影响 | 第41页 |
| (四)受体配体对接实验结果 | 第41-44页 |
| 四、讨论 | 第44-46页 |
| 五、小结 | 第46-47页 |
| 第三章 异戊烯基黄酮类雌激素受体调节剂对β淀粉样蛋白所致原代培养神经元损伤的保护作用 | 第47-66页 |
| 引言 | 第47页 |
| 一、实验材料 | 第47-49页 |
| 二、实验方法 | 第49-52页 |
| (一)原代大鼠皮层神经元的培养 | 第49-50页 |
| (二)免疫细胞化学法鉴定原代培养神经细胞 | 第50页 |
| (三)组别设置和药物处理 | 第50页 |
| (四)细胞活力测定 | 第50-51页 |
| (五)细胞形态观察和突触评价 | 第51页 |
| (六)AO/EB染色法检测细胞凋亡 | 第51页 |
| (七)JC-1染色法检测细胞膜电位水平 | 第51页 |
| (八)Western Blot检测蛋白表达变化 | 第51-52页 |
| (九)分子对接法模拟配体受体亲和力 | 第52页 |
| (十)统计学处理 | 第52页 |
| 三、实验结果 | 第52-61页 |
| (一)原代培养大鼠皮层神经元细胞的形态和鉴定 | 第52-53页 |
| (二)Aβ_(25-35)致神经细胞损伤模型的构建 | 第53页 |
| (三)淫羊藿素对Aβ_(25-35)致损伤模型中神经细胞的活力影响 | 第53-55页 |
| (四)淫羊藿素对Aβ_(25-35)致损伤模型中神经细胞的细胞形态学变化 | 第55-57页 |
| (五)淫羊藿素对Aβ_(25-35)致损伤模型中神经细胞的抗凋亡作用 | 第57页 |
| (六)淫羊藿素对Aβ_(25-35)致损伤模型中凋亡相关蛋白表达的影响 | 第57页 |
| (七)ICI 182,780和PD 98059对淫羊藿素神经保护作用的阻断作用 | 第57-59页 |
| (八)受体配体对接实验 | 第59-61页 |
| 四、讨论 | 第61-65页 |
| 五、小结 | 第65-66页 |
| 第四章 异戊烯基黄酮类雌激素受体调节剂对胚胎干细胞分化为神经细胞的诱导作用 | 第66-89页 |
| 前言 | 第66页 |
| 一、实验仪器与材料 | 第66-67页 |
| 二、实验方法 | 第67-72页 |
| (一)ES细胞常规培养 | 第67-68页 |
| 1.原代小鼠胚胎成纤维细胞制备 | 第67-68页 |
| 2.饲养层细胞制备 | 第68页 |
| 3.ES细胞支持培养 | 第68页 |
| (二)药物诱导ES细胞体外定向分化为神经细胞培养 | 第68-69页 |
| (三)药物诱导ES细胞分化过程中的生物信息和分化机制研究 | 第69-72页 |
| 1.RT-PCR法检测神经分化过程中基因表达 | 第69-71页 |
| 2.免疫荧光法检测神经特异性蛋白和发育相关蛋白表达 | 第71-72页 |
| 3.流式细胞术定量检测标志蛋白阳性细胞 | 第72页 |
| 4.WesternBlot检测蛋白表达变化 | 第72页 |
| 三、实验结果 | 第72-85页 |
| (一)MEF细胞、ES细胞及不同分化阶段的细胞形态观察 | 第72-73页 |
| (二)淫羊藿素对ES细胞体外定向分化为神经细胞的促进作用 | 第73-81页 |
| (三)淫羊藿素诱导ES细胞分化为神经细胞过程生物信息变化 | 第81-83页 |
| 1.分化过程中发育依赖性基因的表达变化 | 第81-82页 |
| 2.分化过程中神经特异性蛋白表达的变化 | 第82页 |
| 3.分化过程中ERK-MAPK,p38-MAPK通路蛋白表达的变化 | 第82-83页 |
| (四)淫羊藿素诱导胚胎干细胞分化为胆碱神经的免疫鉴定 | 第83页 |
| (五)淫羊藿苷和异补骨脂黄酮对ES细胞分化为神经细胞的影响 | 第83-85页 |
| 四、讨论 | 第85-88页 |
| 五、小结 | 第88-89页 |
| 第五章 生物活性导向法分离补益中药补骨脂中异戊烯基黄酮类雌激素受体调节剂 | 第89-100页 |
| 引言 | 第89页 |
| 一、实验材料 | 第89-90页 |
| 二、实验方法 | 第90页 |
| (一)粗提物制备 | 第90页 |
| (二)成分分离 | 第90页 |
| (三)组分活性评价 | 第90页 |
| 三、实验结果 | 第90-91页 |
| 四、讨论 | 第91-94页 |
| 五、小结 | 第94-96页 |
| 六、附录:生物导向分离得到的雌激素样活性化合物结构鉴定数据及结构式 | 第96-100页 |
| 参考文献 | 第100-108页 |
| 综述 雌激素受体调节剂及其在神经保护和发育中的药理活性研究进展 | 第108-127页 |
| 附录 博士在读期间所获科研成果情况 | 第127-129页 |
| 致谢 | 第129页 |
