| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-13页 |
| 第一部分 人肺癌相关新基因的克隆与筛选 | 第13-41页 |
| 一、候选基因的来源及生物信息学初步分析 | 第13-16页 |
| 二、候选基因全长开放阅读框架的克隆及真核表达载体的构建 | 第16-29页 |
| 1.材料 | 第16-18页 |
| 2.方法 | 第18-26页 |
| 3.结果 | 第26-29页 |
| 三、人肺癌相关新基因的功能及表型筛选 | 第29-36页 |
| 1.材料 | 第29-30页 |
| 2.方法 | 第30-33页 |
| 3.结果 | 第33-36页 |
| 四、第一部分讨论 | 第36-40页 |
| 五、第一部分小结 | 第40-41页 |
| 第二部分 人肺癌相关新基因OLC1的生物信息学分析 | 第41-54页 |
| 一、由EST到OLC1全长cDNA | 第41-42页 |
| 二、OLC1开放阅读框架分析 | 第42-44页 |
| 三、OLC1蛋白结构域和序列同源性分析及进化树的建立 | 第44-48页 |
| 四、OLC1染色体定位及基因结构分析 | 第48页 |
| 五、电子表达谱分析 | 第48-49页 |
| 六、OLC1启动子预测 | 第49-50页 |
| 七、第二部分讨论 | 第50-53页 |
| 八、第二部分小结 | 第53-54页 |
| 第三部分 OLC1在肺癌组织及相关细胞系中的表达情况 | 第54-72页 |
| 一、OLC1的原核表达及纯化 | 第54-56页 |
| 1.材料与方法 | 第54-56页 |
| 2.结果 | 第56页 |
| 二、多克隆抗体的制备、纯化与鉴定 | 第56-58页 |
| 1.材料与方法 | 第56-57页 |
| 2.结果 | 第57-58页 |
| 三、OLC1的细胞定位 | 第58-61页 |
| 1.材料与方法 | 第58-60页 |
| 2.结果 | 第60-61页 |
| 四、OLC1在永生化支气管上皮细胞系和肺癌细胞系中的表达情况 | 第61-62页 |
| 1.材料与方法 | 第61-62页 |
| 2.结果 | 第62页 |
| 五、OLC1在肺癌组织及正常对照组织中的表达情况 | 第62-68页 |
| 1.材料与方法 | 第62-64页 |
| 2.结果 | 第64-68页 |
| ·组织切片的免疫组织化学染色结果 | 第64-67页 |
| ·组织微阵列的免疫组织化学染色结果 | 第67-68页 |
| 六、第三部分讨论 | 第68-71页 |
| 七、第三部分小结 | 第71-72页 |
| 第四部分 OLC1作为候选原癌基因的功能研究 | 第72-85页 |
| 一、稳定过表达OLC1的NIH／3T3细胞株的筛选与鉴定 | 第72-74页 |
| 1.材料与方法 | 第72-73页 |
| 2.结果 | 第73-74页 |
| 二、OLC1的异源过表达使NIH／3T3细胞生长速度加快 | 第74-76页 |
| 1.材料与方法 | 第74-75页 |
| 2.结果 | 第75-76页 |
| 三、OLC1的异源过表达使NIH／3T3细胞在软琼脂中形成集落 | 第76-79页 |
| 1.材料与方法 | 第76-77页 |
| 2.结果 | 第77-79页 |
| 四、OLC1的异源过表达使NIH／3T3细胞在裸鼠皮下形成肿瘤 | 第79-82页 |
| 1.材料与方法 | 第79页 |
| 2.结果 | 第79-82页 |
| 五、第四部分讨论 | 第82-84页 |
| 六、第四部分小结 | 第84-85页 |
| 第五部分 RNA干扰沉默OLC1的表达 | 第85-103页 |
| 一、siRNA目标位点的设计及siRNA的化学合成 | 第85-86页 |
| 二、siRNA沉默效果的鉴定 | 第86-92页 |
| 1.材料与方法 | 第86-89页 |
| 2.结果 | 第89-92页 |
| 三、沉默OLC1的表达,引起肺癌细胞系的凋亡 | 第92-96页 |
| 1.材料与方法 | 第92-93页 |
| 2.结果 | 第93-96页 |
| ·显微镜下观察细胞凋亡 | 第93-94页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第94-95页 |
| ·western blot分析 | 第95-96页 |
| 四、沉默OLC1的表达,引起肺癌细胞系生长变缓 | 第96-98页 |
| 1.材料与方法 | 第96-97页 |
| 2.结果 | 第97-98页 |
| 五、沉默OLC1的表达,引起肺癌细胞系集落形成减少 | 第98-100页 |
| 1.材料与方法 | 第98页 |
| 2.结果 | 第98-100页 |
| 六、第五部分讨论 | 第100-102页 |
| 七、第五部分小结 | 第102-103页 |
| 第六部分 OLC1能激活NF-kappaB信号转导途径 | 第103-119页 |
| 一、瞬时表达的OLC1能激活pNF-κB-luc报告基因 | 第103-104页 |
| 1.材料与方法 | 第103-104页 |
| 2.结果 | 第104页 |
| 二、OLC1能促进NF-kappaB向细胞核移位 | 第104-110页 |
| 1.材料与方法 | 第104-108页 |
| 2.结果 | 第108-110页 |
| 三、OLC1对NF-kappaB通路激酶的磷酸化调节作用 | 第110-111页 |
| 1.材料与方法 | 第110页 |
| 2.结果 | 第110-111页 |
| 四、OLC1系列缺失体的构建及其对pNF-κB-luc报告基因的激活作用 | 第111-115页 |
| 1.材料与方法 | 第111-112页 |
| 2.结果 | 第112-115页 |
| 五、第六部分讨论 | 第115-118页 |
| 六、第六部分小结 | 第118-119页 |
| 总结 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-132页 |
| 文献综述 | 第132-142页 |
| 附录 | 第142-152页 |
| 一、主要仪器设备及耗材 | 第142-144页 |
| 二、常用溶液配制 | 第144-146页 |
| 三、统计学分析方法 | 第146-147页 |
| 四、英文缩略词表 | 第147-148页 |
| 五、论文中用到的载体图 | 第148-152页 |
| 致谢 | 第152-153页 |
| 本研究受下列基金资助 | 第153-154页 |
| 学位论文原创性声明 | 第154页 |
| 版权声明 | 第154页 |
