| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一部分 文献综述 | 第9-17页 |
| 1 启动子的结构和双向启动子应用研究进展 | 第9-12页 |
| ·RNA聚合酶Ⅰ的启动子 | 第9页 |
| ·RNA聚合酶Ⅱ的启动子 | 第9-10页 |
| ·RNA聚合酶Ⅲ的启动子 | 第10页 |
| ·双向启动子 | 第10-12页 |
| 2 利用淀粉的酿酒酵母基因工程菌研究进展 | 第12-16页 |
| ·α-淀粉酶的研究概况 | 第12-16页 |
| ·淀粉酶分类 | 第12页 |
| ·生产α-淀粉酶的主要微生物类群 | 第12页 |
| ·α-淀粉酶的应用与发展 | 第12-13页 |
| ·分解淀粉的酿酒酵母工程菌 | 第13-16页 |
| 3 本论文的创新之处和意义 | 第16-17页 |
| 第二部分 研究内容 | 第17-54页 |
| 第一章 MAL1启动子的克隆及其在大肠杆菌中的启动功能分析 | 第17-32页 |
| 1 材料 | 第17-20页 |
| ·菌种和质粒 | 第17页 |
| ·酶及其他主要试剂 | 第17-18页 |
| ·培养基与缓冲液 | 第18-20页 |
| ·实验仪器与设备 | 第20页 |
| 2 实验方法 | 第20-27页 |
| ·质粒构建 | 第20-23页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA碱裂解法提取 | 第20页 |
| ·DNA限制性内切酶酶切 | 第20-21页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第21页 |
| ·凝胶电泳中DNA片段的回收 | 第21-22页 |
| ·连接反应 | 第22页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第22页 |
| ·大肠杆菌细胞的转化 | 第22-23页 |
| ·重组子筛选 | 第23页 |
| ·MAL1启动子的克隆 | 第23-25页 |
| ·MAL1启动子引物的设计与合成 | 第23页 |
| ·酵母总DNA提取 | 第23-24页 |
| ·PCR反应 | 第24页 |
| ·PCR扩增片段凝胶电泳鉴定 | 第24页 |
| ·重组质粒pUCM的构建及鉴定 | 第24-25页 |
| ·MAL1启动子序列测定及其检索与比较 | 第25页 |
| ·含MAL1正反向启动子重组报告质粒的构建及功能分析 | 第25-27页 |
| ·含MAL15′-3′方向的启动子重组报告质粒的构建 | 第25页 |
| ·含MAL13’-5’方向的启动子重组报告质粒的构建 | 第25页 |
| ·MAL1启动子的部分缺失分析 | 第25页 |
| ·MAL1正反向启动子及缺失SacI段的启动子的Zeocin抗性分析 | 第25-27页 |
| 3 结果分析 | 第27-31页 |
| ·MAL1启动子的PCR扩增及其产物的克隆 | 第27页 |
| ·MAL1启动子DNA测序分析 | 第27-28页 |
| ·含MAL1正反向启动子重组质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| ·MAL1启动子的部分缺失分析 | 第29-30页 |
| ·MAL1正反向启动子及缺失SacI段的启动子Zeocin抗性水平分析 | 第30-31页 |
| 4 讨论 | 第31-32页 |
| 第二章 MAL1启动子在酿酒酵母中的启动功能分析：α-amy基因酵母表达载体构建及其分泌表达 | 第32-54页 |
| 1 材料 | 第32-33页 |
| ·菌种和质粒 | 第32-33页 |
| ·酶及其他主要试剂 | 第33页 |
| ·培养基与缓冲液 | 第33页 |
| ·实验仪器与设备 | 第33页 |
| 2 实验方法 | 第33-41页 |
| ·质粒构建 | 第34页 |
| ·α-amy基因的PCR扩增产物的克隆 | 第34-35页 |
| ·α-amy基因引物的设计与合成 | 第34页 |
| ·酵母总DNA提取 | 第34页 |
| ·PCR反应 | 第34页 |
| ·PCR扩增片段凝胶电泳鉴定 | 第34页 |
| ·克隆载体GapZA的构建 | 第34-35页 |
| ·α-amy基因序列测定及其检索与比较 | 第35页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第35-38页 |
| ·酵母表达载体GZAho的构建 | 第35-36页 |
| ·酵母表达载体GMAho5’的构建 | 第36-38页 |
| ·酵母表达载体GMAho3’的构建 | 第38页 |
| ·酵母转化 | 第38-39页 |
| ·酵母表达载体GZAho,GMAho5’,GMAho3’线性化 | 第38页 |
| ·小量LiAc／PEG法制备酵母感受态细胞及其转化 | 第38-39页 |
| ·酵母转化子特性分析 | 第39-41页 |
| ·阳性转化子α-淀粉酶的分泌表达和活性测定 | 第39页 |
| ·酵母转化子生长曲线测定 | 第39页 |
| ·α-淀粉酶在酒精酵母中的诱导表达 | 第39-40页 |
| ·α-amy基因表达产物的SDS-PAGE分析 | 第40-41页 |
| ·细胞壁裂解 | 第41页 |
| ·酵母转化子稳定性检测 | 第41页 |
| 3 结果分析 | 第41-52页 |
| ·α-amy基因PCR产物鉴定及序列分析 | 第41-43页 |
| ·克隆载体GapZA的鉴定 | 第43页 |
| ·酵母重组表达载体GZAho,GMAho5’GMAho3’的鉴定 | 第43-44页 |
| ·酵母转化子的PCR鉴定 | 第44页 |
| ·α-淀粉酶的分泌表达 | 第44-46页 |
| ·酵母转化子α-淀粉酶活性的测定方法 | 第46-47页 |
| ·酵母转化子的表达条件 | 第47-50页 |
| ·培养时间对酵母转化子YZAho表达量的影响 | 第47-48页 |
| ·酵母转化子YMAho5’,YMAho3’的表达条件 | 第48-50页 |
| ·酵母转化子的分泌状况 | 第50-51页 |
| ·酵母转化子稳定性分析 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 在校期间公开发表论文 | 第59-60页 |
| 附:学位论文原创性声明和关于学位论文使用授权的声明 | 第60-61页 |
| 原创性声明 | 第61页 |
| 关于学位论文使用授权的声明 | 第61-62页 |
| 中文详细摘要 | 第62-67页 |
