| 第一章 引言 | 第1-20页 |
| ·概况 | 第11页 |
| ·昆虫病原线虫及其共生细菌 | 第11-15页 |
| ·昆虫病原线虫的生活史 | 第12-13页 |
| ·昆虫病原细菌的型态变异 | 第13-15页 |
| ·昆虫病原线虫的培养及产业化 | 第15页 |
| ·昆虫病原线虫—共生细菌共生关系的研究 | 第15-17页 |
| ·信息诱导作用 | 第15-16页 |
| ·营养作用 | 第16-17页 |
| ·携菌作用 | 第17页 |
| ·大肠杆菌原核表达系统 | 第17-18页 |
| ·本论文的研目的和主要内容 | 第18-20页 |
| ·研究目的 | 第18-19页 |
| ·研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 昆虫病原线虫发育相关基因的鉴定 | 第20-45页 |
| ·实验材料 | 第21-25页 |
| ·线虫、共生细菌的种类及品系 | 第21页 |
| ·质粒与菌株 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·主要试剂和溶液 | 第22-23页 |
| ·无RNA酶实验用品的处理 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| ·技术路线 | 第25-26页 |
| ·研究方法 | 第26-36页 |
| ·单菌线虫S.carpocapsae A24的培养 | 第26页 |
| ·无菌感染期线虫S.carpocapsae A24的获得 | 第26页 |
| ·无菌感染期线虫A24的诱导 | 第26-27页 |
| ·感染期线虫总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·总RNA浓度的测定(紫外分光光度计法) | 第28页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| ·总RNA第一链cDNA的合成 | 第28-31页 |
| ·诱导过的感染期线虫cDNA文库的构建 | 第31-33页 |
| ·克隆片断长度的检测 | 第33页 |
| ·探针模板的合成及探针的制备 | 第33-35页 |
| ·斑点杂交 | 第35-36页 |
| ·序列测定及同源性分析 | 第36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-43页 |
| ·总RNA的完整性 | 第36-37页 |
| ·cDNA的合成 | 第37页 |
| ·诱导线虫cDNA表达文库的构建和鉴定 | 第37-38页 |
| ·探针模板的纯化 | 第38页 |
| ·印迹分析结果 | 第38-39页 |
| ·差异表达克隆序列测定和分析 | 第39-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 spi-583基因的克隆及大肠杆菌原核表达 | 第45-69页 |
| ·实验材料 | 第45-49页 |
| ·线虫、共生细菌的种类及品系 | 第45页 |
| ·质粒与菌株 | 第45页 |
| ·培养基 | 第45页 |
| ·主要试剂和溶液 | 第45-48页 |
| ·主要仪器设备 | 第48-49页 |
| ·技术路线 | 第49-50页 |
| ·研究方法 | 第50-61页 |
| ·总RNA反转录为cDNA | 第50页 |
| ·重组克隆载体pCR4-TOPO-spi-583的构建 | 第50-54页 |
| ·大肠杆菌表达载体pET-15b-spi-583的构建 | 第54-57页 |
| ·重组大肠杆菌生长曲线的测定 | 第57页 |
| ·重组大肠杆菌的诱导表达 | 第57-60页 |
| ·重组质粒稳定性检测 | 第60页 |
| ·Western blot印迹分析 | 第60-61页 |
| ·结果与分析 | 第61-68页 |
| ·spi-583基因的获得 | 第61页 |
| ·重组克隆载体的构建 | 第61-63页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第63-64页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第64-65页 |
| ·重组蛋白的分析 | 第65-66页 |
| ·重组大肠杆菌的生长曲线 | 第66页 |
| ·重组大肠杆菌质粒稳定性的研究 | 第66-67页 |
| ·免疫印记分析 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 附录 | 第79-80页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第80-81页 |
| 作者简历 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 昆虫知识 | 第83-89页 |
