| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-15页 |
| 1 激发子(elicitor) | 第9-13页 |
| ·激发子的种类 | 第9页 |
| ·激发素(elicitin) | 第9-10页 |
| ·HR反应 | 第10页 |
| ·SAR | 第10-11页 |
| ·激发子诱导HR和SAR的信号机制 | 第11-13页 |
| ·激发子基因转化植物产生的抗病性 | 第13页 |
| 2 本论文的研究目的和研究内容 | 第13-15页 |
| 第二章 31kD疫霉胞外蛋白激发子的分离纯化及活性测定 | 第15-21页 |
| 1 材料与方法 | 第15-17页 |
| ·材料 | 第15页 |
| ·烟草愈伤组织的诱导 | 第15页 |
| ·烟草细胞的悬浮培养 | 第15页 |
| ·激发子的分离纯化 | 第15-16页 |
| ·激发子的纯度检测和分子量测定 | 第16页 |
| ·激发子的N端氨基酸序列测定 | 第16页 |
| ·激发子接种烟草叶片实验 | 第16-17页 |
| ·烟草悬浮细胞的激发子处理实验 | 第17页 |
| 2 实验结果 | 第17-19页 |
| ·所得蛋白提取物的纯度和分子量检测结果 | 第17页 |
| ·所得蛋白提取物的N端氨基酸序列测定结果 | 第17-18页 |
| ·蛋白提取物接种烟草叶片的结果 | 第18页 |
| ·蛋白提取物诱导的烟草悬浮细胞死亡 | 第18-19页 |
| 3 讨论 | 第19-21页 |
| 第三章 疫霉核糖体DNA-ITS序列分析 | 第21-27页 |
| 1 材料与方法 | 第21-23页 |
| ·供试菌株与试剂： | 第21页 |
| ·疫霉基因组的提取 | 第21-22页 |
| ·疫霉rDNA-ITs基因序列的扩增 | 第22-23页 |
| 2 结果与分析 | 第23-27页 |
| ·疫霉rDNA-ITS序列扩增 | 第23页 |
| ·疫霉rDNA-ITS序列测定及分析 | 第23-27页 |
| 第四章 疫霉elicitin编码基因及其突变体的克隆、表达和产物活性检测 | 第27-43页 |
| 1 材料与方法 | 第27-35页 |
| ·材料与处理 | 第27页 |
| ·菌株和载体 | 第27页 |
| ·工具酶与试剂盒 | 第27页 |
| ·其它试剂 | 第27页 |
| ·疫霉总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·疫霉总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·RNA的浓度及纯度测定 | 第28页 |
| ·RNA的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| ·elicitin编码基因的克隆 | 第28-32页 |
| ·elicitin编码基因的引物设计与合成 | 第29页 |
| ·疫霉elicitin编码基因的RT-PCR | 第29页 |
| ·RT-PCR产物纯化—割胶回收 | 第29-30页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·连接 | 第30-31页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌(热击法转化大肠杆菌) | 第31页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第31-32页 |
| ·原核表达及检测 | 第32-35页 |
| ·elicitin编码基因及其突变体与表达载体的重组 | 第32页 |
| ·重组表达载体转化大肠杆菌 | 第32页 |
| ·诱导表达 | 第32-33页 |
| ·蛋白质含量测定(Bradford法) | 第33页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第33页 |
| ·GST融合蛋白的亲和层析纯化 | 第33页 |
| ·电转移 | 第33-34页 |
| ·Western blot分析 | 第34页 |
| ·亲和层析纯化的表达融合蛋白接种烟草叶片 | 第34页 |
| ·亲和层析纯化的表达融合蛋白处理烟草悬浮细胞 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-41页 |
| ·RT-PCR产物的克隆与序列测定 | 第35-37页 |
| ·PCR与表达载体的连接与序列测定 | 第37-40页 |
| ·SDS-PAGE电泳和Western blot印迹检测 | 第40页 |
| ·亲和层析纯化的表达融合蛋白接种烟草叶片 | 第40页 |
| ·亲和层析纯化的表达融合蛋白对烟草悬浮细胞的影响 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 附录Ⅰ：培养基配方 | 第46-47页 |
| 附录Ⅱ：溶液配方 | 第47-49页 |
| 本论文中所用英文缩写词的中文含义 | 第49页 |
