| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-26页 |
| 1．1 引言 | 第9页 |
| 1．2 手性化合物的研究意义 | 第9-12页 |
| 1．3 获得手性化合物的主要方法 | 第12-17页 |
| 1．3．1．物理法 | 第12-13页 |
| 1．3．1．1 手性溶剂拆分法 | 第12页 |
| 1．3．1．2 接种结晶拆分法 | 第12-13页 |
| 1．3．2 化学法 | 第13-14页 |
| 1．3．2．1 经典成盐拆分法 | 第13页 |
| 1．3．2．2 组合拆分 | 第13页 |
| 1．3．2．3．萃取拆分法 | 第13-14页 |
| 1．3．3 生物法 | 第14-15页 |
| 1．3．3．1 微生物法 | 第15页 |
| 1．3．3．2 酶法 | 第15页 |
| 1．3．4 色谱法 | 第15-16页 |
| 1．3．4．1 气相色谱法 | 第16页 |
| 1．3．4．2 高效液相色谱法 | 第16页 |
| 1．3．4．3 模拟移动床色谱法 | 第16页 |
| 1．3．5．膜法 | 第16-17页 |
| 1．3．5．1 液体膜拆分 | 第16-17页 |
| 1．3．5．2 手性固定膜拆分 | 第17页 |
| 1．4 微生物制备手性化合物的特点及优势 | 第17-18页 |
| 1．5 微生物全细胞生物不对称合成4-氯-3-羟基丁酸乙酯 | 第18-24页 |
| 1．5．1 微生物全细胞生物不对称合成4-氯-3-羟基丁酸乙酯的原理 | 第18-19页 |
| 1．5．2 影响微生物全细胞生物不对称合成的因素 | 第19-24页 |
| 1．5．2．1 微生物种类 | 第19页 |
| 1．5．2．2 微生物细胞的形式 | 第19-22页 |
| 1．5．2．3 微生物细胞的培养条件 | 第22页 |
| 1．5．2．4 辅助底物及辅酶再生 | 第22页 |
| 1．5．2．5 酶的激活剂或抑制剂 | 第22-23页 |
| 1．5．2．6 反应体系 | 第23-24页 |
| 1．5．2．7 底物浓度及添加方式 | 第24页 |
| 1．6 拟研究的内容和方向 | 第24-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-33页 |
| 2．1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2．1．1 质粒与菌种 | 第26-27页 |
| 2．1．1．1 酵母菌株及培养基 | 第26页 |
| 2．1．1．2 酵母菌株培养方法 | 第26页 |
| 2．1．1．3 大肠杆菌菌种质粒及培养基 | 第26页 |
| 2．1．1．4 试剂 | 第26-27页 |
| 2．1．2 工具酶和试剂盒 | 第27页 |
| 2．1．3 主要仪器 | 第27-28页 |
| 2．2 实验及分析方法 | 第28-33页 |
| 2．2．1 分子克隆相关实验 | 第28页 |
| 2．2．2 菌体浓度的测定 | 第28页 |
| 2．2．3 产物得率及e．e．值分析方法 | 第28-29页 |
| 2．2．4 细胞超声波破碎及胞内蛋白的提取 | 第29页 |
| 2．2．5 蛋白浓度的测定 | 第29-30页 |
| 2．2．6 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第30-31页 |
| 2．2．7 羰基还原酶及葡萄糖脱氢酶酶活测定 | 第31页 |
| 2．2．8 还原糖的测定方法 | 第31-33页 |
| 第三章 微生物菌种的筛选及不对称合成(S)-CHBE | 第33-45页 |
| 3．1 引言 | 第33页 |
| 3．2 材料与方法 | 第33页 |
| 3．2．1 材料与试剂 | 第33页 |
| 3．2．1．1 菌种、培养基与培养方法 | 第33页 |
| 3．2．1．2 试剂 | 第33页 |
| 3．2．2 方法 | 第33页 |
| 3．2．2．1 还原方法 | 第33页 |
| 3．3．2．2 分析方法 | 第33页 |
| 3．3 结果和讨论 | 第33-44页 |
| 3．3．1 菌种的筛选 | 第33-34页 |
| 3．3．2 木兰假丝酵母生长时间对产物得率及e．e．值的影响 | 第34-36页 |
| 3．3．3 木兰假丝酵母保存时间对产物得率及e．e．值的影响 | 第36页 |
| 3．3．4 培养条件及反应条件对产物得率及e．e．值的影响 | 第36-37页 |
| 3．3．5 辅助底物及其添加量对产物得率及e．e．值的影响 | 第37-40页 |
| 3．3．6 转化时间对产物得率及e．e值的影响 | 第40页 |
| 3．3．7 温度对产物得率及e．e．值的影响 | 第40-41页 |
| 3．3．8 pH值对产物得率及ee值的影响 | 第41-42页 |
| 3．3．9 底物的加入量对产物得率及e．e．值的影响 | 第42页 |
| 3．3．10 底物分批加入与一次性加入对产物得率及e．e．值的影响 | 第42-43页 |
| 3．3．11 细胞量对产物得率及e．e．值的影响 | 第43页 |
| 3．3．12 烯丙醇对产物得率及e．e．值的影响 | 第43-44页 |
| 3．4 小结 | 第44-45页 |
| 第四章 两相体系中木兰假丝酵母不对称还原制备(S)-CHBE | 第45-53页 |
| 4．1 引言 | 第45-46页 |
| 4．2 材料与方法 | 第46页 |
| 4．2．1 材料 | 第46页 |
| 4．2．1．1 试剂 | 第46页 |
| 4．2．1．2 菌种 | 第46页 |
| 4．2．1．3 培养基 | 第46页 |
| 4．2．2 方法 | 第46页 |
| 4．2．2．1 菌体培养方法 | 第46页 |
| 4．2．2．2 还原方法 | 第46页 |
| 4．3 结果与讨论 | 第46-52页 |
| 4．3．1 单相和水／乙酸丁酯两相体系的比较 | 第46-47页 |
| 4．3．2 有机溶剂对木兰假丝酵母不对称还原的影响 | 第47-48页 |
| 4．3．3 水相与有机溶剂相体积比对产物得率及e．e．值的影响 | 第48页 |
| 4．3．4 转速对产物得率及e．e．值的影响 | 第48-49页 |
| 4．3．5 葡萄糖浓度对产物得率及e．e．值的影响 | 第49页 |
| 4．3．6 细胞量对产物得率及e．e．值的影响 | 第49-50页 |
| 4．3．7 温度对产物得率及e．e．值的影响 | 第50-51页 |
| 4．3．8 底物加入方式对产物得率及e．e．值的影响 | 第51-52页 |
| 4．4 小结 | 第52-53页 |
| 第五章 热处理木兰假丝酵母制备光学纯(S)-CHBE | 第53-62页 |
| 5．1 引言 | 第53页 |
| 5．2 材料与方法 | 第53-54页 |
| 5．2．1 材料 | 第53页 |
| 5．2．1．1 试剂 | 第53页 |
| 5．2．1．2 菌种 | 第53页 |
| 5．2．1．3 培养基 | 第53页 |
| 5．2．2 方法 | 第53-54页 |
| 5．2．2．1 菌体培养方法 | 第53页 |
| 5．2．2．2 丙酮干细胞及空气干细胞的制备 | 第53页 |
| 5．2．2．3 还原方法 | 第53-54页 |
| 5．3 结果和讨论 | 第54-60页 |
| 5．3．1 加热对产物得率及e．e．值的影响 | 第54-55页 |
| 5．3．2 反应前加热温度对产物得率及e．e．值的影响 | 第55-56页 |
| 5．3．3 加热时间对产物得率及e．e．值的影响 | 第56页 |
| 5．3．4 底物浓度对产物得率及e．e．值的影响 | 第56-57页 |
| 5．3．5 葡萄糖浓度对产物得率及e．e．值的影响 | 第57页 |
| 5．3．6 还原反应温度对产物得率及e．e．值的影响 | 第57-59页 |
| 5．3．7 细胞量对产物得率及e．e．值的影响 | 第59页 |
| 5．3．8 两相体系中的还原反应 | 第59-60页 |
| 5．4 小结 | 第60-62页 |
| 第六章 重组大肠杆菌的构建及不对称还原制备(S)-CHBE | 第62-77页 |
| 6．1 引言 | 第62页 |
| 6．2 材料和方法 | 第62-67页 |
| 6．2．1 菌种、质粒、培养基与培养方法 | 第62-63页 |
| 6．2．2 工具酶和试剂盒 | 第63页 |
| 6．2．3 引物 | 第63页 |
| 6．2．4 羰基还原酶DNA的获得与PCR扩增 | 第63页 |
| 6．2．5 克隆载体的构建 | 第63-64页 |
| 6．2．6 表达载体的构建及酶切鉴定 | 第64-66页 |
| 6．2．7 E. coli M15(pQE30-gdh0310)的构建 | 第66页 |
| 6．2．8 酶活测定 | 第66页 |
| 6．2．9 还原方法 | 第66-67页 |
| 6．3 结果与讨论 | 第67-75页 |
| 6．3．1 培养基的选择 | 第67页 |
| 6．3．2 培养温度 | 第67-68页 |
| 6．3．3 诱导条件 | 第68-70页 |
| 6．3．3．1 诱导温度 | 第68-69页 |
| 6．3．3．2 诱导剂IPTG的加入量 | 第69页 |
| 6．3．3．3 诱导后的发酵时间 | 第69-70页 |
| 6．3．4 各种菌株中酶活的比较 | 第70页 |
| 6．3．5 E. coliM15(pQE30-car)不对称还原COBE | 第70-71页 |
| 6．3．6 底物浓度对单菌转化及混菌转化产物得率的影响 | 第71-72页 |
| 6．3．7 E coliM15(pQE30-car)及E. coliM15(pQE30-gdh0310)质量比对产物得率的影响 | 第72-73页 |
| 6．3．8 温度对产物得率的影响 | 第73页 |
| 6．3．9 单菌培养及混菌培养时NADPH的浓度的变化 | 第73-74页 |
| 6．3．10 两相体系中的还原反应 | 第74-75页 |
| 6．4 小结 | 第75-77页 |
| 第七章 结论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
