| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词一览表 | 第6-7页 |
| 一. 文献综述 | 第7-21页 |
| 1 引言 | 第7页 |
| 2 植物氮素吸收与同化代谢途径 | 第7-8页 |
| ·根细胞中氮素吸收与同化 | 第7页 |
| ·叶肉细胞中氮素吸收与同化 | 第7-8页 |
| 3 高等植物NO_3~-吸收转运系统 | 第8-13页 |
| ·低亲和NO_3~-吸收转运系统(LATS) | 第9页 |
| ·高亲和NO_3~-吸收转运系统(HATS) | 第9-12页 |
| ·亲和NO_3~-吸收转运系统(DATS) | 第12-13页 |
| 4 TaNRT2.1蛋白的结构预测 | 第13-16页 |
| ·从氨基酸组成辨识蛋白质 | 第13-14页 |
| ·预测蛋白质的物理性质 | 第14页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第14-15页 |
| ·其它特殊局部结构 | 第15页 |
| ·蛋白质的三维结构 | 第15-16页 |
| ·细胞定位预测 | 第16页 |
| 5 本实验室以往的工作 | 第16-19页 |
| 6 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 二. 材料和试剂 | 第21-24页 |
| 1 实验材料 | 第21页 |
| 2 酶及抗生素 | 第21页 |
| 3 常用试剂 | 第21-24页 |
| 三. 方法和步骤 | 第24-33页 |
| 1 重组质粒的构建 | 第24-28页 |
| ·pGEX-2T质粒的提取(小量提取法) | 第24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第24-25页 |
| ·pGEX-2T质粒的酶切 | 第25页 |
| ·玻璃奶法回收凝胶中的DNA片段 | 第25页 |
| ·酶切产物5`端去磷酸化 | 第25-26页 |
| ·外源片段的设计及人工合成 | 第26-27页 |
| ·外源片段与质粒载体的连接 | 第27页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的转化和抗性筛选 | 第28页 |
| ·重组质粒的提取 | 第28页 |
| ·重组质粒的单酶切鉴定 | 第28页 |
| 2 重组蛋白的诱导表达及检测纯化 | 第28-31页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第28-29页 |
| ·重组蛋白的检测 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| 3 包涵体的处理 | 第31-33页 |
| ·细菌的裂解(超声波破碎法) | 第31-32页 |
| ·包涵体的分离 | 第32页 |
| ·包涵体的变性和复性 | 第32-33页 |
| 四. 结果和讨论 | 第33-51页 |
| 1 质粒载体pGEX-2T的酶切鉴定 | 第33页 |
| 2 质粒载体双酶切后的酶切鉴定 | 第33-34页 |
| 3 重组质粒的酶切鉴定 | 第34页 |
| 4 重组质粒的测序鉴定 | 第34-35页 |
| 5 融合蛋白的诱导表达 | 第35-37页 |
| ·表达某一种特定蛋白质的大肠杆菌系统的选择 | 第36-37页 |
| ·不溶性蛋白的处理 | 第37页 |
| 6 融合蛋白的纯化 | 第37-40页 |
| ·谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析纯化GST融合蛋白 | 第37-38页 |
| ·云南旺源WyMag-GST磁珠纯化GST融合蛋白 | 第38-39页 |
| ·纯化融合蛋白 | 第39页 |
| ·切割融合蛋白 | 第39-40页 |
| 7 包涵体的变复性 | 第40-44页 |
| ·包涵体的形成 | 第41页 |
| ·包涵体的分离、洗涤及溶解 | 第41-42页 |
| ·包涵体蛋白的复性 | 第42-44页 |
| 8 TaNRT2.1蛋白的预测结果 | 第44-51页 |
| ·TaNRT2.1蛋白物理性质的预测 | 第44-45页 |
| ·TaNRT2.1蛋白的二级结构分析结果 | 第45-46页 |
| ·TaNRT2.1蛋白的特殊结构 | 第46-49页 |
| ·TaNRT2.1蛋白的三维结构预测 | 第49-50页 |
| ·TaNRT2.1蛋白的亚细胞定位预测 | 第50-51页 |
| 五. 结论和展望 | 第51-52页 |
| 六. 参考文献 | 第52-58页 |
| 七. 致谢 | 第58-59页 |
| 八. 附录 | 第59-61页 |