| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-20页 |
| 实验材料 | 第20-26页 |
| 实验方法 | 第26-32页 |
| 1. 大肠杆菌质粒 DNA小量提取 | 第26页 |
| 2. 大肠杆菌质粒 DNA大量提取 | 第26页 |
| 3. 链霉菌质粒 DNA的提取 | 第26页 |
| 4. 链霉菌总 DNA的提取 | 第26-27页 |
| 5. 大肠杆菌 DH-5α感受态细胞的制备 | 第27页 |
| 6. 质粒 DNA转化大肠杆菌 | 第27页 |
| 7. 原生质体的制备、质粒 DNA转化 | 第27-28页 |
| 8. DNA酶切和连接 | 第28页 |
| 9. DNA电泳和片断回收 | 第28-29页 |
| 10. 接合转移实验 | 第29页 |
| 11. 黑暗链霉菌发酵及检测操作的实验方法 | 第29-30页 |
| ·发酵流程 | 第29-30页 |
| ·发酵单位的测定 | 第30页 |
| 12. Southern blot杂交 | 第30-32页 |
| ·DNA从凝胶转移至尼龙膜 | 第30-31页 |
| ·探针标记 | 第31页 |
| ·Southern杂交 | 第31-32页 |
| 结果与讨论 | 第32-69页 |
| 第一部分 妥布霉素抗性基因的鸟枪法克隆 | 第32-36页 |
| 1. 总 DNA提取 | 第33页 |
| 2. 总 DNA的不完全酶切 | 第33页 |
| 3. 克隆载体 pIJ702的处理 | 第33-34页 |
| 4. 连接、转化和阳性克隆的筛选 | 第34页 |
| 5. 转化子的验证 | 第34页 |
| 6. 妥布霉素抗性克隆的抗性水平和抗性谱 | 第34-36页 |
| 第二部分 安普霉素抗性基因连锁序列的分析 | 第36-57页 |
| 1. 重组质粒pSPU41的酶切图谱分析及亚克隆 | 第36页 |
| 2. 序列测定与 DNA序列分析 | 第36-43页 |
| ·序列测定 | 第37-39页 |
| ·测序结果的 FramePlot分析和序列同源性比较 | 第39-43页 |
| 3. 克隆基因功能的初步分析 | 第43-56页 |
| ·阻断载体的构建 | 第44-50页 |
| ·接合转移实验 | 第50-51页 |
| ·单交换基因阻断菌株的获得 | 第51页 |
| ·基因阻断菌株体内游离质粒的考察 | 第51页 |
| ·阻断变株的Southern blot杂交验证 | 第51-55页 |
| ·阻断变株的发酵组分分析 | 第55-56页 |
| ·基因阻断菌株稳定性考察 | 第56页 |
| 4. 讨论 | 第56-57页 |
| 第三部分 妥布霉素抗性基因连锁序列的分析 | 第57-66页 |
| 1. 重组质粒pSPU51的酶谱分析及亚克隆 | 第57页 |
| 2. 部分序列测定 | 第57-60页 |
| 3. 测序结果的 Frameplot分析 | 第60-65页 |
| 4. 讨论 | 第65-66页 |
| 第四部分 黑暗链霉菌结合转移系统的分析与优化 | 第66-69页 |
| 1. 不同温度下游离质粒考察 | 第66-67页 |
| 2. 不同温度下发酵产物的考察 | 第67页 |
| 3. 用于同源交换的片断大小与获得的阳性克隆数目的关系 | 第67-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 附录 | 第74-76页 |
| 发表文章目录 | 第76页 |