| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 概述 | 第6-7页 |
| 实验流程 | 第7-8页 |
| 材料和方法 | 第8-40页 |
| 材料与仪器 | 第8-9页 |
| 方法 | 第9-40页 |
| 通过生物学软件对拟构建的融合蛋白进行初步分析预测 | 第9-10页 |
| 引物设计 | 第10-12页 |
| 提取人外周血单个核细胞总RNA | 第12-13页 |
| 以RNA为模板，RT-PCR扩增目的基因IL-12bSig、sCD80、sCD40L | 第13-15页 |
| 纯化PCR获得的目的基因IL-12bSig、sCD80、sCD40L | 第15-16页 |
| 将纯化后的IL-12bSig、sCD80、sCD40L分别连入T载体 | 第16页 |
| 重组T Easy载体的扩增及鉴定 | 第16-19页 |
| 扩增并提取经测序验证的重组载体 | 第19-20页 |
| 以测序验证的重组载体为模板，PCR扩增目的基因IL-12bSig、sCD80并纯化 | 第20页 |
| 重叠PCR构建并扩增融合基因IL-12bSig-sCD80 | 第20-22页 |
| 纯化PCR获得的目的基因IL-12bSig-sCD80、连入T载体、扩增并测序鉴定 | 第22页 |
| 换接头引入Linker | 第22-23页 |
| 重叠PCR构建并扩增融合基因IL-12bSig-sCD80-Linker-sCD40L | 第23-25页 |
| 纯化PCR获得的目的基因IL-12bSig-sCD80-Linker-sCD40L、连入T载体、扩增并测序鉴定 | 第25页 |
| 重组腺病毒载体构建及腺病毒扩增 | 第25-36页 |
| Westen blot测定 | 第36-40页 |
| 结果 | 第40-68页 |
| 通过生物学软件对拟构建的融合蛋白进行的初步分析预测 | 第40-49页 |
| RNA电泳 | 第49页 |
| PCR鉴定 | 第49-50页 |
| 重组T载体酶切鉴定和重组Shuttle载体酶切鉴定 | 第50-51页 |
| 重组载体的序列分析 | 第51-64页 |
| 重组骨架载体的酶切分析 | 第64-65页 |
| 镜下观察到的转染后AD-293细胞的变化 | 第65-67页 |
| 病毒滴度测定 | 第67页 |
| Westen blot结果 | 第67-68页 |
| 讨论 | 第68-75页 |
| 小结 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 缩略语 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 综述: CD40L在肿瘤治疗中的作用 | 第84-91页 |
