| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| Ⅰ 前言 | 第10-11页 |
| Ⅱ 文献综述 | 第11-24页 |
| 1 国内外棉花育种研究进展 | 第11-16页 |
| ·维品质改良的育种现状与品种利用状况 | 第11-13页 |
| ·棉花育种技术的发展 | 第13-14页 |
| ·基因工程技术在棉纤维品质改良中的应用现状 | 第14-16页 |
| ·利用色素合成酶基因改变棉纤维的色泽 | 第14-15页 |
| ·利用角兔蛋白基因等改良棉纤维强度的研究 | 第15-16页 |
| ·利用PHB合成酶基因提高棉纤维品质的研究 | 第16页 |
| 2 羟基丁酸酯的合成及其应用 | 第16-20页 |
| ·PHB的生物合成机理 | 第16-17页 |
| ·PHB的应用 | 第17-18页 |
| ·用微生物生产PHB的研究概况 | 第18-19页 |
| ·利用转基因植物作为生物反应器生产PHB | 第19-20页 |
| 3 棉纤维发育过程中特异调控元件的研究进展 | 第20-23页 |
| 4 棉花的遗传转化方法 | 第23-24页 |
| Ⅲ 技术路线 | 第24页 |
| Ⅳ 实验结果与分析 | 第24-62页 |
| 1 纤维特异性启动子LTP12和FbL2A的克隆 | 第24-34页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-30页 |
| ·棉花总基因组DNA的提取和检测 | 第25-26页 |
| ·棉花总DNA提取 | 第25-26页 |
| ·DNA检测 | 第26页 |
| ·PCR反应体系 | 第26-27页 |
| ·PCR反应程 | 第27页 |
| ·目的片断的回收 | 第27页 |
| ·目的片断与pUcm-TVector载体的连接 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第27-28页 |
| ·小量碱法提取质粒 | 第28页 |
| ·酶切 | 第28-29页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的转化 | 第29页 |
| ·农杆菌Ti质粒DNA碱法小量提取 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-34页 |
| ·棉花基因组总DNA的提取 | 第30页 |
| ·棉花特异启动子LTP12的克隆 | 第30-33页 |
| ·棉花特异性启动子LTP12的克隆 | 第31-32页 |
| ·棉花特异性启动子FbL2A的克隆 | 第32-33页 |
| ·棉花特异启动元件GUS表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·棉花特异启动子LTP12 GUS表达载体pBLTP的构建 | 第33页 |
| ·棉花特异性启动子FbL2A GUS表达载体pBF2A的构建 | 第33-34页 |
| 2 聚羟基丁酸合成酶基phaB与phaC的克隆 | 第34-52页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·试验方法 | 第35-41页 |
| ·PCR反应体系 | 第35页 |
| ·PCR反应的循环参数 | 第35页 |
| ·PCR扩增片断的回收 | 第35页 |
| ·目的片断与载体的连接 | 第35-36页 |
| ·与pUcm-T vector的连接 | 第35页 |
| ·目的片断与表达载体(PET-28C)的连接 | 第35-36页 |
| ·目的片断与植物表达载体(pBI121)的连接 | 第36页 |
| ·载体的构建 | 第36-39页 |
| ·基因phbB原核表达载体pETPB的构建 | 第36页 |
| ·基因phbC原核表达载体pETPC载体的构建 | 第36页 |
| ·植物表达载体pBLTPPB的构建 | 第36页 |
| ·植物表达载体pBFPB的构建 | 第36页 |
| ·植物表达载体pBLTPPC的构建 | 第36页 |
| ·植物表达载体pBFPC的构建 | 第36-37页 |
| ·植物双价表达载体pBLTPPBPC的构建 | 第37-38页 |
| ·植物双架表达载体pBFBL2APPBPC的构建 | 第38-39页 |
| ·目的片段的补平，回收 | 第38-39页 |
| ·连接 | 第39页 |
| ·筛选重组子 | 第39页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备(DH5a、BL21)、连接反应物的转化、重组子的筛选等与前面的相同 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·微生物宿主菌中目的基因的诱导表达 | 第39-40页 |
| ·蛋白质电泳 | 第40-41页 |
| ·胶的制备 | 第40-41页 |
| ·样品制备及电泳 | 第41页 |
| ·凝胶的染色与脱色 | 第41页 |
| ·酶与试剂 | 第41页 |
| ·酶与试剂 | 第41页 |
| ·实验结果 | 第41-51页 |
| ·聚羟基合成酶基因phaB的克隆 | 第41-43页 |
| ·基因phaC的克隆 | 第43-47页 |
| ·载体的构建及其检测 | 第47-51页 |
| ·phaB基因的微生物表达载体pETPB的构建与检测 | 第47页 |
| ·phaC基因的微生物表达载体(pETPC)的构建与检测 | 第47-48页 |
| ·载体pBLTPPB的构建及检测 | 第48页 |
| ·载体pBFPB的构建及检测 | 第48-49页 |
| ·载体pBLTPPC的构建及检测 | 第49页 |
| ·pBFPC载体的构建及检测 | 第49-50页 |
| ·载体pBLTPPBPC的构建及检测 | 第50页 |
| ·pBFPBPC载体的构建及检测 | 第50-51页 |
| ·目的基因phaB与phaC的诱导表达结果与分析 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-55页 |
| ·棉纤维启动子的讨论 | 第53-54页 |
| ·在棉纤维中合成PHB的讨论 | 第54-55页 |
| 4 实验小结 | 第55-57页 |
| 5 参考文献 | 第57-62页 |
| 6 致谢 | 第62页 |
