| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-11页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第12-19页 |
| 1．1 杨树育种研究进展 | 第12-14页 |
| 1．1．1 常规育种 | 第12-13页 |
| 1．1．2 基因工程育种 | 第13-14页 |
| 1．2 SP超强启动子研究进展 | 第14-16页 |
| 1．3 内含子对转化外源基因的表达调控作用的研究进展 | 第16-17页 |
| 1．4 选题依据 | 第17-19页 |
| 1．4．1 转基因研究对象的选择 | 第17-18页 |
| 1．4．2 启动子的选择 | 第18页 |
| 1．4．3 检测基因的选择 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-32页 |
| 2．1 材料 | 第19-22页 |
| 2．1．1 植物材料 | 第19页 |
| 2．1．2 菌株质粒 | 第19页 |
| 2．1．3 细菌培养基 | 第19-20页 |
| 2．1．4 植物激素和植物培养基 | 第20页 |
| 2．1．4．1 植物激素 | 第20页 |
| 2．1．4．2 植物培养基 | 第20页 |
| 2．1．5 试剂 | 第20-22页 |
| 2．1．5．1 抗生素 | 第20页 |
| 2．1．5．2 植物基因组DNA提取液 | 第20-21页 |
| 2．1．5．3 质粒提取液 | 第21页 |
| 2．1．5．4 电泳缓冲液配制 | 第21页 |
| 2．1．5．5 GUS检测缓冲液的配制 | 第21-22页 |
| 2．1．6 酶与生化试剂 | 第22页 |
| 2．1．7 PCR引物 | 第22页 |
| 2．2 实验方法 | 第22-32页 |
| 2．2．1 碱法提取少量质粒DNA | 第22-23页 |
| 2．2．2 植物基因组DNA的提取 | 第23页 |
| 2．2．3 植物表达载体的构建及鉴定 | 第23-28页 |
| 2．2．3．1 中间载体pUCGI的构建 | 第23-24页 |
| 2．2．3．2 植物表达载体pBI2的构建 | 第24-25页 |
| 2．2．3．3 中间载体pUCG的构建 | 第25-26页 |
| 2．2．3．4 植物表达载体pBISN2的构建 | 第26页 |
| 2．2．3．5 重组子的筛选及鉴定 | 第26-28页 |
| 2．2．4 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备及转化 | 第28页 |
| 2．2．4．1 一步法制备DH5α感受态细胞 | 第28页 |
| 2．2．4．2 转化 | 第28页 |
| 2．2．5 根癌农杆菌EH105感受态的制备及转化 | 第28页 |
| 2．2．5．1 制备根癌农杆菌EH105感受态细胞 | 第28页 |
| 2．2．5．2 转化 | 第28页 |
| 2．2．6 杨树高频再生体系的建立 | 第28-29页 |
| 2．2．7 农杆菌介导法转基因 | 第29页 |
| 2．2．8 转基因杨树的PCR检测 | 第29页 |
| 2．2．9 GUS基因瞬时表达的组织化学检测 | 第29-30页 |
| 2．2．10 荧光光度计定量分析转化植株GUS基因稳定表达活性 | 第30-32页 |
| 2．2．10．1 新鲜的植物组织GUS蛋白的提取 | 第30页 |
| 2．2．10．2 GUS蛋白提取液蛋白含量测定 | 第30页 |
| 2．2．10．3 GUS酶活反应 | 第30-31页 |
| 2．2．10．4 荧光测定 | 第31页 |
| 2．2．10．5 酶活力的计算 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-54页 |
| 3．1 载体的构建及鉴定 | 第32-39页 |
| 3．1．1 中间载体pUCGI的构建及酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 3．1．1．1 中间载体pUCGI的构建 | 第32-33页 |
| 3．1．1．2 中间载体pUCGI的酶切鉴定 | 第33页 |
| 3．1．2 表达载体pBI2的构建及酶切鉴定 | 第33-35页 |
| 3．1．2．1 表达载体pBI2的构建 | 第33页 |
| 3．1．2．2 表达载体pBI2的酶切鉴定 | 第33-35页 |
| 3．1．3 中间载体pUCG的构建及酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 3．1．3．1 中间载体pUCG的构建 | 第35-36页 |
| 3．1．3．2 中间载体pUCG的酶切鉴定 | 第36页 |
| 3．1．4 表达载体pBISN2的构建及酶切鉴定 | 第36-38页 |
| 3．1．4．1 表达载体pBISN2的构建 | 第36页 |
| 3．1．4．2 表达载体pBISN2的酶切鉴定 | 第36-38页 |
| 3．1．5 表达载体的PCR鉴定 | 第38-39页 |
| 3．2 BT-18号三倍体毛白杨高频再生体系的建立 | 第39-42页 |
| 3．2．1 组培苗的获得 | 第39-40页 |
| 3．2．1．1 壮苗培养基的筛选 | 第39页 |
| 3．2．1．2 褐化问题的解决 | 第39-40页 |
| 3．2．1．3 玻璃化问题的解决 | 第40页 |
| 3．2．2 叶片培养诱导芽分化培养基的筛选 | 第40-41页 |
| 3．2．3 组培苗生根培养基的筛选 | 第41-42页 |
| 3．3 BT-18号三倍体毛白杨遗传转化体系的建立 | 第42-45页 |
| 3．3．1 选择压的确定 | 第42-44页 |
| 3．3．2 农杆菌介导法获得转基因植株 | 第44-45页 |
| 3．4 转基因植株的PCR检测 | 第45-46页 |
| 3．5 转基因植株的GUS分析 | 第46-54页 |
| 3．5．1GUS基因的瞬时表达的组织化学染色检测 | 第47-48页 |
| 3．5．2 GUS基因的稳定表达的组织化学染色检测 | 第48-50页 |
| 3．5．3 GUS基因的稳定表达的荧光定量检测 | 第50-54页 |
| 3．5．3．1 各组织荧光定量检测 | 第50-52页 |
| 3．5．3．2 GUS活性随组织生长龄的变化 | 第52-54页 |
| 4 讨论 | 第54-60页 |
| 4．1 载体构建应注意问题的总结 | 第54-55页 |
| 4．2 转基因植株的PCR检测及污染的消除 | 第55页 |
| 4．3 SP启动子的下一步应用设想 | 第55-57页 |
| 4．4 关于内含子及基因沉默问题的一点探讨 | 第57-59页 |
| 4．5 下一步工作设想 | 第59-60页 |
| 5． 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第69页 |
