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烟草中乙烯受体NTHK2全长基因的克隆和功能研究

中文摘要第1-8页
英文摘要第8-10页
缩略词第10-12页
引言第12-26页
 1 蛋白磷酸化与两组分信号系统第13-17页
 2 酵母的渗透调节两组分信号系统第17页
 3 植物的乙烯信号传递途径第17-21页
 4 植物其它两组分信号系统基因第21-22页
 5 乙烯信号传递与植物的逆境胁迫反应第22-23页
 6 结语第23-26页
第一部分 烟草中乙烯受体NTHK2全长基因的克隆第26-33页
 1 材料与方法第26-27页
  1.1 材料处理第26页
  1.2 烟草总RNA的提取第26页
  1.3一 链cDNA的合成第26-27页
  1.45 '-RACE第27页
  1.5 序列同源性比较与分析第27页
 2 结果与分析第27-33页
  2.1 NTHK2全长基因的克隆第27-28页
  2.2 烟草NTHK2基因的结构第28-33页
第二部分 NTHK2基因的表达模式—Southern和RT-PCR第33-40页
 一. NTHK2的Southern研究第33-36页
  1 材料与方法第33-35页
   1.1 材料处理第33页
   1.2 DNA的提取第33页
   1.3 酶切第33页
   1.4 琼脂糖凝胶电泳与Southern吸印第33-34页
   1.5 分子杂交第34-35页
  2 结果与分析第35-36页
 二. NTHK2的表达模式--RT-PCR第36-40页
  1 材料与方法第37-38页
   1.1 逆境胁迫的处理第37页
   1.2 烟草总RNA的提取第37页
   1.3 烟草总RNA的逆转录第37页
   1.4 PCR反应第37-38页
  2 结果与分析第38-40页
   2.1 乙烯处理中受诱导第38页
   2.2 不同发育阶段的转录水平第38页
   2.3 不同组织及NaCl处理的转录第38页
   2.4 伤害、CaCl2、干旱和冷处理的转录第38页
   2.5 ABA和热处理的转录第38-40页
第三部分 NTHK2的转基因研究第40-47页
 1 材料与方法第40-44页
  1.1 植物双元表达载体构建第40-43页
   1.1.1 从E.coli中提纯质粒第40-41页
   1.1.2 目的基因扩增第41页
   1.1.3 从琼脂糖凝胶上回收NTHK2的片段第41-42页
   1.1.4 酶切第42页
   1.1.5 连接第42-43页
   1.1.6 XL1-BLUE菌株感受态细胞的制备第43页
   1.1.7 大肠杆菌的电击转化第43页
  1.2 NTHK2基因转化拟南芥第43-44页
 2 结果与分析第44-47页
第四部分 酵母双杂交鉴定与NTHK1相互作用的下游基因第47-59页
 1 材料和方法第49-51页
  1.1 材料的处理第49页
  1.2 酵母双杂交的筛库第49-51页
   1.2.1 构建Bait载体第49-50页
   1.2.2 酵母的感受态细胞的制备第50页
   1.2.3 酵母热激转化第50页
   1.2.4 筛选阳性克隆第50-51页
 2 结果与分析第51-55页
 讨论第55-59页
  1.1 烟草NTHK2全长基因的克隆第55页
  1.2 NTHK2的Souther blot和RT-PCR第55-57页
  1.3 NTHK2的转基因研究第57-58页
  1.4 酵母双杂交筛选与NTHK1相互作用的下游基因第58-59页
结论第59-60页
参考文献第60-71页
致谢第71-72页
攻读学位期间发表的学术论文目录第72页

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