中文摘要 | 第1-8页 |
英文摘要 | 第8-10页 |
缩略词 | 第10-12页 |
引言 | 第12-26页 |
1 蛋白磷酸化与两组分信号系统 | 第13-17页 |
2 酵母的渗透调节两组分信号系统 | 第17页 |
3 植物的乙烯信号传递途径 | 第17-21页 |
4 植物其它两组分信号系统基因 | 第21-22页 |
5 乙烯信号传递与植物的逆境胁迫反应 | 第22-23页 |
6 结语 | 第23-26页 |
第一部分 烟草中乙烯受体NTHK2全长基因的克隆 | 第26-33页 |
1 材料与方法 | 第26-27页 |
1.1 材料处理 | 第26页 |
1.2 烟草总RNA的提取 | 第26页 |
1.3一 链cDNA的合成 | 第26-27页 |
1.45 '-RACE | 第27页 |
1.5 序列同源性比较与分析 | 第27页 |
2 结果与分析 | 第27-33页 |
2.1 NTHK2全长基因的克隆 | 第27-28页 |
2.2 烟草NTHK2基因的结构 | 第28-33页 |
第二部分 NTHK2基因的表达模式—Southern和RT-PCR | 第33-40页 |
一. NTHK2的Southern研究 | 第33-36页 |
1 材料与方法 | 第33-35页 |
1.1 材料处理 | 第33页 |
1.2 DNA的提取 | 第33页 |
1.3 酶切 | 第33页 |
1.4 琼脂糖凝胶电泳与Southern吸印 | 第33-34页 |
1.5 分子杂交 | 第34-35页 |
2 结果与分析 | 第35-36页 |
二. NTHK2的表达模式--RT-PCR | 第36-40页 |
1 材料与方法 | 第37-38页 |
1.1 逆境胁迫的处理 | 第37页 |
1.2 烟草总RNA的提取 | 第37页 |
1.3 烟草总RNA的逆转录 | 第37页 |
1.4 PCR反应 | 第37-38页 |
2 结果与分析 | 第38-40页 |
2.1 乙烯处理中受诱导 | 第38页 |
2.2 不同发育阶段的转录水平 | 第38页 |
2.3 不同组织及NaCl处理的转录 | 第38页 |
2.4 伤害、CaCl2、干旱和冷处理的转录 | 第38页 |
2.5 ABA和热处理的转录 | 第38-40页 |
第三部分 NTHK2的转基因研究 | 第40-47页 |
1 材料与方法 | 第40-44页 |
1.1 植物双元表达载体构建 | 第40-43页 |
1.1.1 从E.coli中提纯质粒 | 第40-41页 |
1.1.2 目的基因扩增 | 第41页 |
1.1.3 从琼脂糖凝胶上回收NTHK2的片段 | 第41-42页 |
1.1.4 酶切 | 第42页 |
1.1.5 连接 | 第42-43页 |
1.1.6 XL1-BLUE菌株感受态细胞的制备 | 第43页 |
1.1.7 大肠杆菌的电击转化 | 第43页 |
1.2 NTHK2基因转化拟南芥 | 第43-44页 |
2 结果与分析 | 第44-47页 |
第四部分 酵母双杂交鉴定与NTHK1相互作用的下游基因 | 第47-59页 |
1 材料和方法 | 第49-51页 |
1.1 材料的处理 | 第49页 |
1.2 酵母双杂交的筛库 | 第49-51页 |
1.2.1 构建Bait载体 | 第49-50页 |
1.2.2 酵母的感受态细胞的制备 | 第50页 |
1.2.3 酵母热激转化 | 第50页 |
1.2.4 筛选阳性克隆 | 第50-51页 |
2 结果与分析 | 第51-55页 |
讨论 | 第55-59页 |
1.1 烟草NTHK2全长基因的克隆 | 第55页 |
1.2 NTHK2的Souther blot和RT-PCR | 第55-57页 |
1.3 NTHK2的转基因研究 | 第57-58页 |
1.4 酵母双杂交筛选与NTHK1相互作用的下游基因 | 第58-59页 |
结论 | 第59-60页 |
参考文献 | 第60-71页 |
致谢 | 第71-72页 |
攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第72页 |