| 一、 中文摘要 | 第1-9页 |
| 二、 英文摘要 | 第9-12页 |
| 三、 前言 | 第12-16页 |
| 四、 实验材料 | 第16-19页 |
| 五、 实验方法 | 第19-29页 |
| 六、 实验结果 | 第29-75页 |
| （一） 基于基因敲除技术所建立的突变检测系统及DNA损伤修复研究 | 第29-56页 |
| 1 NIH3T3细胞MGMT基因的定向敲除及其突变检测系统的建立 | 第29-34页 |
| （1） MGMT基因组DNA结构分析 | 第29页 |
| （2） 含有MGMT基因第二外显子的分离及鉴定 | 第29-30页 |
| （3） 针对Exon2定向敲除的基因打靶载体基因组片段的获得 | 第30-31页 |
| （4） 利用pSSC-9载体针对MGMTExon2的基因打靶载体构建 | 第31-33页 |
| （5） 含有pMCLacI/neo穿梭载体的NIH3T3细胞系的建立 | 第33页 |
| （6） 定向敲除MGMT基因的NIH3T3细胞的突变检测系统的建立 | 第33-34页 |
| 2 针对MGMTExon5基因敲除的突变检测系统的建立 | 第34-38页 |
| （1） 基因打靶载体pMT?E5-NEO-Tk | 第35页 |
| （2） 利用二次基因打靶的方法筛选MGMT纯合子策略 | 第35-36页 |
| （3） 针对MGMTExon5定向敲除的鉴定策略 | 第36页 |
| （4） 针对MGMTExon5定向敲除的突变检测系统鉴定结果 | 第36-38页 |
| 3 高表达MGMT基因的突变检测系统的建立 | 第38-45页 |
| （1） MGMT基因全长cDNA表达载体的构建 | 第38-40页 |
| （2） PcDL81-MGMT获得及测序鉴定 | 第40-43页 |
| （3） 高表达MGMT基因的突变检测系统的建立 | 第43-45页 |
| 4 烷化剂MNNG在三种不同MGMT基因表型细胞内的诱变研究 | 第45-56页 |
| （1） 诱变后三种细胞的生长状态 | 第46-47页 |
| （2） 流式细胞仪分析结果 | 第47-49页 |
| （3） 烷化剂诱导的细胞凋亡与损伤 | 第49-50页 |
| （4）三 种表型细胞的突变子回收及诱发突变率及突变谱分析 | 第50-56页 |
| （二） 基于转基因小鼠技术所建立的突变检测系统及其应用研究 | 第56-75页 |
| 1 一 种新型的双功能体内突变检测系统的建立 | 第56-60页 |
| （1） pMCLacI/neo质粒DNA的提取、鉴定和纯化 | 第56页 |
| （2） pMCLacI/neo转基因小鼠的制备及仔鼠鉴定 | 第56-57页 |
| （3） 从转基因小鼠的基因组DNA中回收pMCLacI/neo及功能鉴定 | 第57-59页 |
| （4） 小鼠的建系及交配育种工作 | 第59-60页 |
| 2 pMCLacI/neo转基因小鼠靶基因突变检测的新策略 | 第60-64页 |
| （1） M9/L正向选择LacI靶基因突变子的原理 | 第60页 |
| （2） 利用正向选择系统进行pMCLacI/neo突变靶基因筛选的新策略 | 第60-62页 |
| （3） 表达基因的突变子检测 | 第62页 |
| （4） 沉默基因的突变子检测 | 第62页 |
| （5） M9/L平板筛选突变子的效率 | 第62-64页 |
| 3 MNNG对pMCLacI/neo转基因小鼠不同组织靶基因的诱变研究 | 第64-75页 |
| （1） MNNG诱变处理pMCLacI/Neo转基因小鼠 | 第64-65页 |
| （2） 转基因小鼠的胃、肝、骨髓pMCLacI/Neo载体回收 | 第65页 |
| （3） 转基因小鼠自发突变率及诱发突变频率 | 第65-66页 |
| （4） 突变区域及相应的突变类型分析 | 第66-75页 |
| 七 讨论 | 第75-86页 |
| （1） 转基因动物突变研究模型所采用的靶基因 | 第75-76页 |
| （2） 转基因与内源基因的比较 | 第76页 |
| （3） 影响诱变率的有关因素 | 第76-77页 |
| （4） 突变子的筛选和分离方法 | 第77-78页 |
| （5） 靶基因的回收 | 第78-80页 |
| （6） 用作突变研究的穿梭载体应满足的条件 | 第80页 |
| （7） 转基因小鼠的建系 | 第80页 |
| （8） 每微克基因组DNA的回收效率 | 第80-81页 |
| （9） MGMT的基因定位及表达调控 | 第81-83页 |
| （10） MGMT与肿瘤发生与治疗 | 第83-86页 |
| 八 研究工作小结 | 第86-88页 |
| 九 参考文献 | 第88-92页 |
| 十 综述 | 第92-125页 |
| 附录 | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127页 |
