| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-22页 |
| ·β-葡聚糖概述 | 第9页 |
| ·纤维素概述 | 第9-10页 |
| ·β-1,4-葡聚糖酶 | 第10-14页 |
| ·性质与分布 | 第10-11页 |
| ·结构特征 | 第11-12页 |
| ·基因工程研究 | 第12-14页 |
| ·毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统 | 第14-21页 |
| ·表达载体 | 第15页 |
| ·宿主菌株 | 第15页 |
| ·优化表达的策略 | 第15-20页 |
| ·发酵条件优化 | 第20-21页 |
| ·研究目的: | 第21-22页 |
| 第二章 黑曲霉来源的内切β-1,4-葡聚糖酶基因克隆及其在毕赤酵母中的表达 | 第22-37页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·菌株与质粒 | 第22页 |
| ·工具酶 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·培养基和部分溶液的配制 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-31页 |
| ·黑曲霉中菌丝RNA的提取 | 第24页 |
| ·反转录 | 第24-25页 |
| ·葡聚糖酶基因的克隆 | 第25页 |
| ·序列测定 | 第25-26页 |
| ·酵母重组表达载体的构建 | 第26-28页 |
| ·重组酵母的构建 | 第28-30页 |
| ·重组酵母的产酶发酵 | 第30页 |
| ·酶活检测 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第30页 |
| ·重组酶的酶学性质 | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-35页 |
| ·葡聚糖酶基因的克隆 | 第31页 |
| ·葡聚糖酶基因序列的测定 | 第31页 |
| ·表达质粒的构建及验证 | 第31-33页 |
| ·重组酵母的筛选 | 第33页 |
| ·重组酵母工程菌的产酶发酵 | 第33-34页 |
| ·重组酶的酶学性质 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 内切β-1,4-葡聚糖酶基因优化及其在毕赤酵母中的表达 | 第37-55页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·菌株与质粒 | 第37页 |
| ·工具酶 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·培养基和部分溶液的配制 | 第37-38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-44页 |
| ·内切β-1,4-葡聚糖酶基因(egⅠ)密码子优化 | 第38页 |
| ·密码子优化的内切β-1,4-葡聚糖酶基因的合成 | 第38-41页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第41页 |
| ·重组表达载体pPIC9K-syn-eg Ⅰ的抽提和验证 | 第41页 |
| ·重组酵母的构建 | 第41页 |
| ·重组酵母的筛选 | 第41-42页 |
| ·发酵条件的优化 | 第42页 |
| ·发酵条件的优化 | 第42-43页 |
| ·重组酵母发酵罐水平高密度发酵 | 第43-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-51页 |
| ·密码子优化的内切β-1,4-葡聚糖酶基因syn-eg Ⅰ的合成 | 第44页 |
| ·密码子优化的内切β-1,4-葡聚糖酶基因syn-eg Ⅰ的序列测定 | 第44-45页 |
| ·重组表达载体的验证 | 第45-47页 |
| ·重组酵母的筛选 | 第47-48页 |
| ·发酵条件的优化 | 第48-49页 |
| ·发酵罐水平的高密度发酵 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第51-55页 |
| ·密码子优化 | 第51页 |
| ·基因合成技术 | 第51-52页 |
| ·发酵条件的优化 | 第52-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 附录1 Vector NTI Suite软件比对测序结果 | 第61-62页 |
| 附录2 硕士期间发表的论文情况 | 第62页 |
