| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 综述 | 第12-32页 |
| 第一节 狂犬病毒的分子生物学研究进展 | 第12-20页 |
| ·狂犬病毒的形态结构 | 第12-13页 |
| ·狂犬病毒的基因组结构 | 第13-14页 |
| ·狂犬病毒的各种蛋白质结构及其功能 | 第14-20页 |
| ·糖蛋白的结构及与功能的关系 | 第14-18页 |
| ·糖蛋白的结构 | 第14-15页 |
| ·糖蛋白的功能 | 第15-18页 |
| ·核蛋白的结构及与功能的关系 | 第18-20页 |
| ·核蛋白的结构 | 第18页 |
| ·核蛋白的功能 | 第18-20页 |
| 第二节 衣藻叶绿体遗传转化策略及研究进展 | 第20-30页 |
| ·衣藻的生物学特征 | 第20-30页 |
| ·形态和生理学特点 | 第20-21页 |
| ·衣藻的分子遗传学特点 | 第21-23页 |
| ·衣藻叶绿体遗传转化策略 | 第23-24页 |
| ·衣藻叶绿体转化中的外源DNA导入技术 | 第24-25页 |
| ·衣藻叶绿体转化中的筛选标记 | 第25-26页 |
| ·叶绿体内源选择标记 | 第26页 |
| ·叶绿体的外源选择标记 | 第26-27页 |
| ·衣藻叶绿体遗传转化的研究进展 | 第27-30页 |
| 第三节 论文设计思路和实验方案 | 第30-32页 |
| ·试验目的、可行性分析及意义 | 第30页 |
| ·实验方案 | 第30-31页 |
| ·技术路线 | 第31-32页 |
| 第二章 衣藻叶绿体表达载体的构建及转化 | 第32-53页 |
| ·材料和方法 | 第32-45页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·菌株 | 第32页 |
| ·质粒 | 第32页 |
| ·分子生物学试剂及试验引物 | 第32-33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·常用试剂的配制 | 第33-36页 |
| ·培养基的配制 | 第33-34页 |
| ·常用溶液及缓冲液的配制 | 第34-36页 |
| ·碱裂解法小量制备质粒DNA用溶液 | 第34-35页 |
| ·玻璃奶回收所需溶液的配制: | 第35页 |
| ·核酸电泳所用溶液 | 第35-36页 |
| ·试验方法 | 第36-45页 |
| ·用PCR的方法扩增G,N基因 | 第36-37页 |
| ·碱法少量快速抽提质粒DNA | 第37页 |
| ·DNA和RNA浓度测定 | 第37页 |
| ·质粒DNA的限制性内切酶反应 | 第37-38页 |
| ·玻璃奶法纯化回收DNA片段 | 第38页 |
| ·DNA片段的修饰 | 第38页 |
| ·DNA连接 | 第38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·质粒DNA或连接产物的转化 | 第39页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第39-40页 |
| ·菌落PCR法鉴定 | 第39页 |
| ·快速细胞破碎法鉴定 | 第39-40页 |
| ·酶切鉴定 | 第40页 |
| ·DNA测序 | 第40页 |
| ·碱裂解法大量制备质粒DNA | 第40-41页 |
| ·质粒DNA的纯化 | 第41-42页 |
| ·酚/氯仿抽提法 | 第41页 |
| ·聚乙二醇(PEG)法纯化质粒DNA | 第41-42页 |
| ·核酸的定量 | 第42页 |
| ·衣藻的培养 | 第42-43页 |
| ·衣藻受体细胞的准备 | 第43页 |
| ·微粒子弹(DNA coated microprojectiles)的制备 | 第43页 |
| ·装备基因枪 | 第43-44页 |
| ·转基因衣藻的筛选 | 第44-45页 |
| ·转化衣藻的过渡培养 | 第44页 |
| ·转化衣藻的筛选培养 | 第44页 |
| ·衣藻转化子的同质化筛选 | 第44-45页 |
| ·实验结果 | 第45-53页 |
| ·G,N基因的PCR | 第45-46页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第45-46页 |
| ·基因序列测定及编码序列分析 | 第46页 |
| ·G,N基因衣藻叶绿体表达载体的构建 | 第46-49页 |
| ·patpY-G,patpY-N重组质粒的鉴定 | 第48页 |
| ·p64D-G,p64D-N重组质粒的鉴定 | 第48-49页 |
| ·衣藻转化子的获得 | 第49-53页 |
| 第三章 狂犬病毒抗原G和N基因在衣藻叶绿体中的表达 | 第53-65页 |
| ·材料 | 第53-55页 |
| ·试剂 | 第53页 |
| ·试剂的配制 | 第53-55页 |
| ·SDS-PAGE电泳试剂的配制 | 第53-54页 |
| ·Bradford法测定蛋白含量所需试剂 | 第54-55页 |
| ·ELISA所需试剂 | 第55页 |
| ·Western blot试剂 | 第55页 |
| ·试验方法 | 第55-59页 |
| ·衣藻DNA的提取 | 第55-56页 |
| ·叶绿体转基因衣藻的PCR检测 | 第56-57页 |
| ·衣藻总蛋白的提取 | 第57页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第57-58页 |
| ·Western blot检测 | 第58页 |
| ·ELISA检测 | 第58-59页 |
| ·叶绿体转基因衣藻的黑暗培养及表型分析 | 第59页 |
| ·实验结果 | 第59-65页 |
| ·衣藻转化子G,N编码区DNA的PCR检测 | 第59-60页 |
| ·衣藻转化子同质化程度的PCR检测 | 第60-61页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第61-62页 |
| ·Western blot检测 | 第62页 |
| ·ELISA检测 | 第62-63页 |
| ·转基因衣藻的表型分析 | 第63-65页 |
| 第四章 讨论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 致谢 | 第72页 |