| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 前言 | 第14-20页 |
| 第一章 pET28a-GnRH-P53、pET28a-GnRH-ODD-P53、pET28a-GnRHⅢ-P53 及pET28a-GnRHⅢ-ODD-P53 原核表达载体构建与蛋白表达 | 第20-39页 |
| 一、实验材料 | 第20-22页 |
| 二、实验方法 | 第22-27页 |
| 三、实验结果 | 第27-35页 |
| 1. pET28a-GnRH-P53 系列质粒的构建流程 | 第27-29页 |
| 2. 基因测序图谱片段 | 第29页 |
| 3. pET28a-GnRH-P53 系列质粒的 PCR 扩增和酶切鉴定 | 第29-33页 |
| 4. pET28a-GP 系列质粒在大肠杆菌中的表达 | 第33-34页 |
| 5. GP 等系列融合蛋白包涵体洗涤、融合蛋白的溶解、复性与纯化 | 第34-35页 |
| 6. Western blot | 第35页 |
| 四、讨论 | 第35-39页 |
| 第二章 GnRH-p53、GnRH-ODD-p53、GnRHⅢ-p53 及GnRHⅢ-ODD-p53 的细胞内转导作用研究 | 第39-55页 |
| 一、实验材料 | 第39-41页 |
| 二、实验方法 | 第41-44页 |
| 三、实验结果 | 第44-52页 |
| 1. Western blot 检测细胞GnRH 受体及p53 蛋白的表达 | 第44-45页 |
| 2. 细胞免疫化学法测定细胞GnRH 受体及p53 蛋白的表达 | 第45-46页 |
| 3. 细胞免疫化学法测定融合蛋白的细胞内转导作用 | 第46-47页 |
| 4. 细胞免疫荧光法测定不同氧分压下细胞内p53 融合蛋白 | 第47页 |
| 5. Western blot 测定不同氧分压下细胞内p53 融合蛋白的结果 | 第47-50页 |
| 6. 融合蛋白细胞内转导机制研究 | 第50-52页 |
| 四、讨论 | 第52-55页 |
| 第三章 GnRH-p53、GnRH-ODD-p53、GnRHⅢ-p53 及GnRHⅢ-ODD-p53 体外生物学作用研究 | 第55-72页 |
| 一、实验材料 | 第55-56页 |
| 二、实验方法 | 第56-57页 |
| 三、实验结果 | 第57-68页 |
| 1. GP 等融合蛋白及 GnRH 类似物对肿瘤细胞生长抑制作用 | 第57-61页 |
| 2. 流式细胞仪 Annexin V-FITC/PI 测定融合蛋白诱导肿瘤细胞凋亡作用 | 第61-62页 |
| 3. 流式细胞仪测定融合蛋白对肿瘤细胞周期的影响 | 第62-64页 |
| 4. Western blot 测定融合蛋白对 P53 下游基因的调控作用 | 第64-68页 |
| 四、讨论 | 第68-72页 |
| 第四章 GnRH-p53、GnRH-ODD-p53、GnRHⅢ-p53 及GnRHⅢ-ODD-p53 对荷瘤模型小鼠的抗肿瘤作用研究 | 第72-82页 |
| 一、实验材料 | 第72页 |
| 二、实验方法 | 第72-73页 |
| 三、实验结果 | 第73-79页 |
| 1. 荷瘤小鼠模型制备 | 第73-74页 |
| 2. 荷瘤小鼠给药后瘤体体积和瘤重比较 | 第74页 |
| 3. 免疫组织化学测定荷瘤模型小鼠肿瘤及肝脏中p53 蛋白 | 第74-75页 |
| 4. 小鼠血浆生化指标测定 | 第75-76页 |
| 5. 免疫组织化学测定荷瘤模型小鼠肿瘤及肝脏Caspase-3 蛋白p、21 蛋白及 PUMA 蛋白 | 第76-79页 |
| 四、讨论 | 第79-82页 |
| 结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 附录一 在学期间撰写的文章及申请的专利 | 第88-89页 |
| 附录二 文献综述 | 第89-99页 |
| 附录三 个人简历 | 第99页 |
