目录 | 第1-8页 |
中文摘要 | 第8-11页 |
Abstract | 第11-13页 |
缩略语表 | 第13-16页 |
前言 | 第16-20页 |
实验材料 | 第20-28页 |
1. 细胞系 | 第20页 |
2. 药物 | 第20页 |
3. 主要生化试剂 | 第20-21页 |
4. 抗体 | 第21-22页 |
5. 质粒和细菌菌株 | 第22-24页 |
6. 分子生物学试剂盒 | 第24页 |
7. 引物和探针 | 第24-26页 |
8. 临床试验病例 | 第26页 |
9. 主要仪器 | 第26-28页 |
实验方法 | 第28-48页 |
1. Hsc70 siRNA转染对肝细胞生长状态及对病毒表达的影响 | 第28-31页 |
·siRNA的设计合成 | 第28页 |
·RNA干扰对细胞生长状态的研究 | 第28页 |
·siRNA的转染 | 第28-30页 |
·real-time PCR分析 | 第30-31页 |
2. 肝细胞内Hsc70基因高水平表达对病毒复制的影响 | 第31-36页 |
·基本分子生物学实验方法 | 第31-34页 |
·重组质粒的构建及表达 | 第34-35页 |
·瞬时转染 | 第35页 |
·质粒转染 | 第35-36页 |
3. OMTR作用对肝癌细胞生长状态的研究 | 第36-38页 |
·流式细胞仪分析细胞周期变化 | 第36-37页 |
·MTT测定药物TC_(50) | 第37页 |
·生长曲线的绘制 | 第37-38页 |
4. OMTR作用细胞后HBV DNA及Hsc70基因表达水平的检测 | 第38-40页 |
·OMTR作用细胞后HBV DNA及Hsc70基因表达水平的检测 | 第38页 |
·用TRIzol试剂提取RNA的方法 | 第38-39页 |
·细胞内Hsc70蛋白的检测 | 第39-40页 |
·OMTR下调肝细胞Hsc70基因表达的特异性研究 | 第40页 |
5. OMTR影响Hsc70 mRNA稳定性的机理研究 | 第40-42页 |
·重组质粒的构建及表达 | 第41页 |
·Hsc70 mRNA T_(1/2)的测定 | 第41-42页 |
6. OMTR体外抗HBV活性的研究 | 第42-43页 |
·逆转录反应 | 第42页 |
·病毒mRNA水平的检测 | 第42页 |
·病毒复制中间体的检测 | 第42-43页 |
7. OMTR体外耐药性研究 | 第43-44页 |
·OMTR长期作用2215细胞对病毒复制的影响 | 第43页 |
·OMTR对耐药细胞病毒复制中间体的影响 | 第43-44页 |
8. OMTR、PFA与ADV联合用药对2215细胞中HBV复制的影响 | 第44-46页 |
·PFA、ADV和OMTR联合用药处理2215细胞 | 第44页 |
·细胞DNA的提取 | 第44页 |
·Dot Blot分析法 | 第44-46页 |
9. 临床试验 | 第46-47页 |
·OMTR作用于3TC耐药患者疗效观察 | 第46页 |
·肝脏活检 | 第46-47页 |
·耐药研究 | 第47页 |
10. 统计分析 | 第47-48页 |
结果与讨论 | 第48-76页 |
1. 宿主细胞Hsc70是HBV复制的辅助因子 | 第48-53页 |
2. OMTR抑制HBV复制的机理研究 | 第53-61页 |
3. OMTR通过降低Hsc70 mRNA的稳定性来下调其表达 | 第61-62页 |
4. OMTR在Hsc70 mNRA上的反应元件位于3’UTR | 第62-63页 |
5. OMTR体外抗病毒的研究 | 第63-70页 |
6. OMTR体外抗HBV耐药性研究 | 第70-72页 |
7. OMTR能有效抑制慢性乙型肝炎患者及耐药慢性乙型肝炎患者的HBV复制 | 第72-76页 |
结论 | 第76-78页 |
参考文献 | 第78-85页 |
文献综述:热休克蛋白70的结构和功能 | 第85-105页 |
参考文献 | 第99-105页 |
博士学习期间发表的文章 | 第105页 |
参加的学术会议 | 第105-106页 |
致谢 | 第106页 |