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Hsc70蛋白:抗HBV耐药的理论与实践

目录第1-8页
中文摘要第8-11页
Abstract第11-13页
缩略语表第13-16页
前言第16-20页
实验材料第20-28页
 1. 细胞系第20页
 2. 药物第20页
 3. 主要生化试剂第20-21页
 4. 抗体第21-22页
 5. 质粒和细菌菌株第22-24页
 6. 分子生物学试剂盒第24页
 7. 引物和探针第24-26页
 8. 临床试验病例第26页
 9. 主要仪器第26-28页
实验方法第28-48页
 1. Hsc70 siRNA转染对肝细胞生长状态及对病毒表达的影响第28-31页
   ·siRNA的设计合成第28页
   ·RNA干扰对细胞生长状态的研究第28页
   ·siRNA的转染第28-30页
   ·real-time PCR分析第30-31页
 2. 肝细胞内Hsc70基因高水平表达对病毒复制的影响第31-36页
   ·基本分子生物学实验方法第31-34页
   ·重组质粒的构建及表达第34-35页
   ·瞬时转染第35页
   ·质粒转染第35-36页
 3. OMTR作用对肝癌细胞生长状态的研究第36-38页
   ·流式细胞仪分析细胞周期变化第36-37页
   ·MTT测定药物TC_(50)第37页
   ·生长曲线的绘制第37-38页
 4. OMTR作用细胞后HBV DNA及Hsc70基因表达水平的检测第38-40页
   ·OMTR作用细胞后HBV DNA及Hsc70基因表达水平的检测第38页
   ·用TRIzol试剂提取RNA的方法第38-39页
   ·细胞内Hsc70蛋白的检测第39-40页
   ·OMTR下调肝细胞Hsc70基因表达的特异性研究第40页
 5. OMTR影响Hsc70 mRNA稳定性的机理研究第40-42页
   ·重组质粒的构建及表达第41页
   ·Hsc70 mRNA T_(1/2)的测定第41-42页
 6. OMTR体外抗HBV活性的研究第42-43页
   ·逆转录反应第42页
   ·病毒mRNA水平的检测第42页
   ·病毒复制中间体的检测第42-43页
 7. OMTR体外耐药性研究第43-44页
   ·OMTR长期作用2215细胞对病毒复制的影响第43页
   ·OMTR对耐药细胞病毒复制中间体的影响第43-44页
 8. OMTR、PFA与ADV联合用药对2215细胞中HBV复制的影响第44-46页
   ·PFA、ADV和OMTR联合用药处理2215细胞第44页
   ·细胞DNA的提取第44页
   ·Dot Blot分析法第44-46页
 9. 临床试验第46-47页
   ·OMTR作用于3TC耐药患者疗效观察第46页
   ·肝脏活检第46-47页
   ·耐药研究第47页
 10. 统计分析第47-48页
结果与讨论第48-76页
 1. 宿主细胞Hsc70是HBV复制的辅助因子第48-53页
 2. OMTR抑制HBV复制的机理研究第53-61页
 3. OMTR通过降低Hsc70 mRNA的稳定性来下调其表达第61-62页
 4. OMTR在Hsc70 mNRA上的反应元件位于3’UTR第62-63页
 5. OMTR体外抗病毒的研究第63-70页
 6. OMTR体外抗HBV耐药性研究第70-72页
 7. OMTR能有效抑制慢性乙型肝炎患者及耐药慢性乙型肝炎患者的HBV复制第72-76页
结论第76-78页
参考文献第78-85页
文献综述:热休克蛋白70的结构和功能第85-105页
 参考文献第99-105页
博士学习期间发表的文章第105页
参加的学术会议第105-106页
致谢第106页

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