| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 缩略语表 | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 金属蛋白酶组织抑制因子研究进展 | 第11-19页 |
| ·前言 | 第11页 |
| ·TIMP结构与分类 | 第11-13页 |
| ·TIMP生物学功能 | 第13-16页 |
| ·其他脊椎动物的TIMP | 第16页 |
| ·无脊椎动物TIMP | 第16-17页 |
| ·cDNA文库的构建与EST分析技术 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 褶纹冠蚌血细胞cDNA文库的构建及EST序列的分析 | 第19-33页 |
| ·实验材料 | 第19-21页 |
| ·实验动物 | 第19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19-20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·载体和菌株 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-24页 |
| ·样品总RNA的抽提 | 第21页 |
| ·mRNA纯化 | 第21-22页 |
| ·cDNA合成、酶切及分级分离 | 第22-23页 |
| ·cDNA与pBluescript Ⅱ SK~*载体的连接 | 第23页 |
| ·重组质粒的转化 | 第23页 |
| ·文库滴度及质量检测 | 第23-24页 |
| ·cDNA文库的筛选与测序 | 第24页 |
| ·EST测序结果分析 | 第24页 |
| ·结果 | 第24-31页 |
| ·总RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·cDNA合成、酶切及分级分离 | 第25-26页 |
| ·文库的滴度及库容 | 第26页 |
| ·EST的测序及结果分析 | 第26-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 褶纹冠蚌TIMP基因的克隆与表达 | 第33-53页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·实验动物 | 第33页 |
| ·主要仪器设备见第二章 | 第33页 |
| ·试剂和菌株见第二章 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-40页 |
| ·总RNA提取 | 第34页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第34页 |
| ·3’RACE的扩增 | 第34-35页 |
| ·序列分析及系统进化树的构建 | 第35-36页 |
| ·荧光定量分析TIMP基因的组织分布 | 第36-37页 |
| ·嗜水气单胞菌刺激后TIMP基因的表达变化 | 第37页 |
| ·TIMP基因的原核表达 | 第37-38页 |
| ·重组cpTIMP和N-TIMP的诱导表达及表达条件的优化 | 第38-39页 |
| ·重组表达蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·结果 | 第40-51页 |
| ·褶纹冠蚌血细胞中总RNA的纯度 | 第40页 |
| ·Cp-T-P的cDNA序列及推导的氨基酸序列特征 | 第40-42页 |
| ·多重序列比较和进化树分析 | 第42-45页 |
| ·TIMP的组织分布 | 第45-46页 |
| ·细菌刺激后TIMP在褶纹冠蚌血细胞、肝胰腺和鳃组织中的表达变化 | 第46-47页 |
| ·TIMP的原核表达与纯化 | 第47-51页 |
| ·cpTIMP和cp-N-TIMP重组质粒的构建 | 第47页 |
| ·cpTIMP和cp-N-TIMP重组蛋白的诱导和纯化 | 第47-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第59页 |
