| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-23页 |
| ·赤霉素研究进展 | 第9-16页 |
| ·赤霉素简介 | 第9-10页 |
| ·赤霉素生物合成 | 第10-11页 |
| ·赤霉素合成的前体——牻牛儿牻牛儿焦磷酸(GGPP)的形成途径 | 第10-11页 |
| ·赤霉素生物合成途径 | 第11页 |
| ·赤霉素生物合成过程中的基因克隆 | 第11-12页 |
| ·赤霉素在植物体内的运输 | 第12-13页 |
| ·赤霉素的信号转导 | 第13-16页 |
| ·GA 信号转导途径中的组成元件及其功能 | 第13-15页 |
| ·GA 的信号转导模型 | 第15-16页 |
| ·GA3-氧化酶基因的研究现状 | 第16-19页 |
| ·GA3-氧化酶及其基因 | 第16-18页 |
| ·GA3-氧化酶基因表达调控 | 第18-19页 |
| ·反馈调节 | 第18页 |
| ·光照调节 | 第18页 |
| ·温度调节 | 第18-19页 |
| ·GA20-氧化酶基因的研究现状 | 第19-21页 |
| ·GA20-氧化酶及其基因 | 第19-20页 |
| ·GA20-氧化酶基因表达调控 | 第20-21页 |
| ·反馈调节 | 第20页 |
| ·光照调节 | 第20-21页 |
| ·温度调节 | 第21页 |
| ·赤霉素在植物中的应用 | 第21-23页 |
| ·赤霉素与植物花芽休眠相关 | 第21页 |
| ·赤霉素在植物花期调控中的应用 | 第21-23页 |
| 2 引言 | 第23-24页 |
| 3 材料与方法 | 第24-31页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·菌株与载体 | 第24页 |
| ·工具酶及生化试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·PCR 引物 | 第24页 |
| ·试验方法 | 第24-31页 |
| ·总RNA 提取及质量鉴定 | 第24-26页 |
| ·试剂和器皿的准备 | 第24-25页 |
| ·试验准备 | 第25页 |
| ·Triol 法提取RNA 操作步骤 | 第25页 |
| ·总RNA 质量及浓度测定 | 第25-26页 |
| ·反转录 | 第26页 |
| ·菊花GA20-氧化酶基因中间片断的克隆 | 第26页 |
| ·菊花GA3-氧化酶基因中间片断的克隆 | 第26页 |
| ·PCR 扩增产物的检测与回收纯化 | 第26-27页 |
| ·回收产物与pUCM-T 载体的连接 | 第27页 |
| ·菊花GA20-氧化酶基因回收产物与pUCM-T 载体的连接 | 第27页 |
| ·菊花GA3-氧化酶基因回收产物与pUCM-T 载体的连接 | 第27页 |
| ·重组载体对大肠杆菌的转化 | 第27-28页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·DNA 的热击转化 | 第28页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第28-30页 |
| ·碱-裂解法重组质粒的提取 | 第28-30页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第30页 |
| ·酶切鉴定 | 第30页 |
| ·序列测定 | 第30页 |
| ·序列分析方法 | 第30-31页 |
| 4 结果与分析 | 第31-44页 |
| ·菊花RNA 质量检测及第一链的获得 | 第31页 |
| ·菊花GA20-氧化酶基因和GA3-氧化酶基因片段的克隆 | 第31-33页 |
| ·GA20-氧化酶基因和GA3-氧化酶基因片段的PCR 产物电泳结果 | 第31-32页 |
| ·GA20-氧化酶基因和GA3-氧化酶基因片段的回收及重组质粒的酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·菊花GA20-氧化酶基因和GA3-氧化酶基因片段的序列分析 | 第33-44页 |
| ·菊花GA20-氧化酶基因片段的测序结果与分析 | 第33-40页 |
| ·GA20-氧化酶基因片段的测序结果 | 第33-35页 |
| ·三个GA20-ox 部分片段的核苷酸与氨基酸序列分析 | 第35-39页 |
| ·三个GA20-ox 部分片段的蛋白保守结构域分析 | 第39-40页 |
| ·菊花GA3-氧化酶基因片段的测序结果与分析 | 第40-44页 |
| ·GA3-氧化酶基因片段的测序结果 | 第40-41页 |
| ·两个GA3-ox 部分片段的核苷酸与氨基酸分析 | 第41-44页 |
| 5 讨论 | 第44-48页 |
| ·设计寡核苷酸应注意的问题 | 第44-46页 |
| ·选择引物的一般规则 | 第44页 |
| ·引物的3’末端不互补 | 第44页 |
| ·引物分子内不互补 | 第44页 |
| ·引物的内部稳定性 | 第44页 |
| ·引物的唯一性 | 第44页 |
| ·兼并引物的设计和PCR 反应条件 | 第44-46页 |
| ·总RNA 分离和储藏条件 | 第46页 |
| ·菊花总RNA 分离 | 第46页 |
| ·RNA 的储藏条件 | 第46页 |
| ·生物信息学在菊花基因克隆中的应用 | 第46-47页 |
| ·GA20-氧化酶和GA3-氧化酶的多基因家族现象 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-58页 |
| 英文摘要 | 第58-59页 |
