| 内容提要 | 第1-14页 |
| 英文缩略词 | 第14-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-46页 |
| ·基因治疗的研究进展及发展前景 | 第16-25页 |
| ·基因治疗的基本概念 | 第16页 |
| ·基因治疗的发展现状 | 第16-17页 |
| ·基因治疗的途径 | 第17页 |
| ·基因治疗的导入系统 | 第17-23页 |
| ·病毒载体系统 | 第17-20页 |
| ·非病毒载体系统 | 第20-23页 |
| ·基因治疗中的关键点 | 第23-24页 |
| ·有效目的基因的选择 | 第23页 |
| ·目的基因的稳定表达 | 第23-24页 |
| ·目的基因转染的靶向性 | 第24页 |
| ·完善的载体系统 | 第24页 |
| ·基因治疗中存在的问题 | 第24-25页 |
| ·基因治疗的安全性问题 | 第24-25页 |
| ·基因治疗中的伦理问题 | 第25页 |
| ·基因治疗中专利争夺问题 | 第25页 |
| ·基因治疗的前景 | 第25页 |
| ·肿瘤的基因治疗 | 第25-27页 |
| ·抑癌基因治疗 | 第25-26页 |
| ·抗致癌基因治疗 | 第26页 |
| ·抗肿瘤血管生成基因治疗 | 第26页 |
| ·药物敏感基因治疗 | 第26-27页 |
| ·免疫基因治疗 | 第27页 |
| ·多药耐药基因治疗 | 第27页 |
| ·肿瘤基因-放射治疗 | 第27-33页 |
| ·肿瘤基因-放射治疗的理论 | 第27-28页 |
| ·基因-放射治疗分类 | 第28-31页 |
| ·药物敏感基因系统与放射治疗的联合 | 第28页 |
| ·肿瘤抑制基因与放射治疗的联合 | 第28-29页 |
| ·免疫基因治疗与放射治疗的联合 | 第29页 |
| ·电离辐射诱导启动子的基因治疗 | 第29-30页 |
| ·双（多）基因治疗与放射治疗的联合 | 第30-31页 |
| ·放疗保护性基因治疗 | 第31页 |
| ·Egr-1 介导的肿瘤基因-放射治疗研究进展 | 第31-33页 |
| ·Egr-1 基因的结构及辐射诱导特性 | 第31-32页 |
| ·辐射诱导Egr-1 启动下游基因表达的研究进展 | 第32-33页 |
| ·TRAIL与肿瘤 | 第33-40页 |
| ·TRAIL的结构特点 | 第34页 |
| ·TRAIL的表达调控 | 第34页 |
| ·TRAIL的受体 | 第34-36页 |
| ·TRAILR1（DR4） | 第35页 |
| ·TRAILR2（DR5） | 第35页 |
| ·TRAILR3（DcR1） | 第35页 |
| ·TRAILR4（DcR2） | 第35-36页 |
| ·OPG | 第36页 |
| ·TRAIL受体的表达调控 | 第36页 |
| ·TRAIL诱导调亡的分子机制 | 第36-37页 |
| ·TRAIL诱导凋亡的死亡受体途径 | 第36-37页 |
| ·TRAIL诱导凋亡的线粒体途径 | 第37页 |
| ·TRAIL诱导凋亡的NF-κB途径 | 第37页 |
| ·正常细胞逃逸凋亡的机制 | 第37-38页 |
| ·诱骗受体的保护作用 | 第37-38页 |
| ·cFLIP对凋亡通路的封闭 | 第38页 |
| ·凋亡抑制蛋白的作用 | 第38页 |
| ·其他 | 第38页 |
| ·TRAIL在肿瘤研究中的应用 | 第38-40页 |
| ·TRAIL抗肿瘤研究现状 | 第38-39页 |
| ·TRAIL抗肿瘤作用 | 第39-40页 |
| ·TRAIL 的安全性 | 第40页 |
| ·endostatin与肿瘤 | 第40-46页 |
| ·endostatin的发现及结构特点 | 第40-41页 |
| ·endostatin的组织分布 | 第41页 |
| ·endostatin的抗血管生成作用及机制 | 第41-43页 |
| ·endostatin抑制血管内皮细胞增殖 | 第42页 |
| ·endostatin诱导内皮细胞周期阻滞和细胞凋亡 | 第42页 |
| ·endostatin抑制内皮细胞迁移、粘附过程 | 第42-43页 |
| ·endostatin与肿瘤的相关性 | 第43页 |
| ·内皮抑素抗肿瘤血管生成治疗的研究 | 第43-46页 |
| ·直接使用重组内皮抑素蛋白 | 第43-44页 |
| ·通过载体转导内皮抑素基因 | 第44页 |
| ·其他内皮抑素治疗方法 | 第44页 |
| ·内皮抑素与其他治疗手段联合应用 | 第44-46页 |
| 第2章 材料与方法 | 第46-60页 |
| ·主要试剂及器材 | 第46-48页 |
| ·试剂 | 第46-47页 |
| ·器材 | 第47-48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·质粒与菌株 | 第48-49页 |
| ·细胞株 | 第49页 |
| ·照射条件 | 第49页 |
| ·细胞生物学实验方法 | 第49-51页 |
| ·培养液配制 | 第49页 |
| ·胎牛血清制备 | 第49页 |
| ·D-Hank’s液的配制 | 第49页 |
| ·胰酶的配制 | 第49-50页 |
| ·细胞培养 | 第50页 |
| ·细胞冻存 | 第50页 |
| ·细胞转染 | 第50页 |
| ·细胞毒性检测 | 第50页 |
| ·FCM检测细胞凋亡 | 第50-51页 |
| ·FCM检测细胞周期 | 第51页 |
| ·分子生物学实验方法 | 第51-59页 |
| ·细菌培养技术 | 第51-54页 |
| ·溶液的配制 | 第51-52页 |
| ·细菌复苏 | 第52页 |
| ·细菌培养 | 第52页 |
| ·细菌冻存 | 第52页 |
| ·感受态菌的制备（氯化钙法） | 第52页 |
| ·细菌转化 | 第52-53页 |
| ·质粒提取 | 第53-54页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第54-59页 |
| ·组织和细胞中总RNA提取 | 第54-55页 |
| ·RNA的定量 | 第55页 |
| ·引物设计及合成 | 第55页 |
| ·RT-PCR法钓取shES基因 | 第55-56页 |
| ·PCR获得Egr-1 启动子和shTRAIL基因 | 第56页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第56页 |
| ·RT-PCR产物鉴定及测序 | 第56-57页 |
| ·DNA操作 | 第57-58页 |
| ·重组子的鉴定 | 第58页 |
| ·目的基因的表达 | 第58-59页 |
| ·统计学方法 | 第59-60页 |
| 第3章 实验结果 | 第60-106页 |
| ·重组质粒的构建及鉴定 | 第60-73页 |
| ·目的基因的获得 | 第60-66页 |
| ·Egr-1 启动子的获得和鉴定 | 第60-61页 |
| ·shTRAIL基因的获得和鉴定 | 第61-63页 |
| ·shES基因的获得和鉴定 | 第63-66页 |
| ·重组质粒的构建及鉴定 | 第66-73页 |
| ·重组单基因质粒pshuttle-Egr1-shES的构建及鉴定 | 第66-68页 |
| ·重组单基因质粒pshuttle-Egr1-shTRAIL的构建及鉴定 | 第68-70页 |
| ·重组双基因质粒pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES的构建及鉴定 | 第70-73页 |
| ·X射线照射后重组质粒在MCF-7 细胞中的辐射诱导表达规律 | 第73-84页 |
| ·X射线照射后重组质粒转染的MCF-7 细胞中shTRAIL表达水平变化 | 第73-78页 |
| ·2.0 Gy X射线照射后重组质粒转染的MCF-7 细胞中shTRAIL mRNA表达的时程变化 | 第73-74页 |
| ·2.0 Gy X射线照射后重组质粒转染的MCF-7 细胞上清中shTRAIL蛋白表达的时程变化 | 第74-75页 |
| ·不同剂量X射线照射后重组质粒转染的MCF-7 细胞中 shTRAIL mRNA表达的量效变化 | 第75-77页 |
| ·不同剂量X射线照射后重组质粒转染的MCF-7 细胞上清中shTRAIL蛋白表达的量效变化 | 第77-78页 |
| ·X射线照射后重组质粒转染的MCF-7 细胞中shES表达水平变化 | 第78-84页 |
| ·2.0 Gy X射线照射后重组质粒转染的MCF-7 细胞中shES mRNA表达的时程变化 | 第78-80页 |
| ·2.0 Gy X射线照射后重组质粒转染的MCF-7 细胞上清中shES蛋白表达的时程变化 | 第80-81页 |
| ·不同剂量X射线照射后重组质粒转染的MCF-7 细胞中shES mRNA表达的量效变化 | 第81-83页 |
| ·不同剂量X射线照射后重组质粒转染的MCF-7 细胞上清中shES蛋白表达的量效变化 | 第83-84页 |
| ·X射线照射后重组质粒在ECV304 细胞中的辐射诱导表达规律 | 第84-96页 |
| ·X射线照射后重组质粒转染的ECV304 细胞中shTRAIL表达水平变化 | 第84-90页 |
| ·2.0 Gy X射线照射后重组质粒转染的ECV304 细胞中shTRAIL mRNA表达的时程变化 | 第84-86页 |
| ·2.0 Gy X射线照射后重组质粒转染的ECV304 细胞上清中shTRAIL蛋白表达的时程变化 | 第86-87页 |
| ·不同剂量X射线照射后重组质粒转染的ECV304 细胞中shTRAIL mRNA表达的量效变化 | 第87-89页 |
| ·不同剂量X射线照射后重组质粒转染的ECV304 细胞上清中shTRAIL蛋白表达的量效变化 | 第89-90页 |
| ·X射线照射后重组质粒转染的ECV304 细胞中shES表达水平变化 | 第90-96页 |
| ·2.0 Gy X射线照射后重组质粒转染的ECV304 细胞中shES mRNA表达的时程变化 | 第90-92页 |
| ·2.0 Gy X射线照射后重组质粒转染的ECV304 细胞上清中shES蛋白表达的时程变化 | 第92-93页 |
| ·不同剂量X射线照射后重组质粒转染的ECV304 细胞中shES mRNA表达的量效变化 | 第93-95页 |
| ·不同剂量X射线照射后重组质粒转染的ECV304 细胞上清中shES蛋白表达的量效变化 | 第95-96页 |
| ·重组质粒联合X射线照射对MCF-7 细胞作用的实验研究 | 第96-101页 |
| ·重组质粒联合X射线照射对MCF-7 细胞的生长抑制作用 | 第96-99页 |
| ·重组质粒联合2.0 Gy X射线照射对MCF-7细胞生长抑制的时程效应 | 第96-98页 |
| ·重组质粒联合不同剂量X射线照射对MCF-7 细胞生长抑制的剂量效应 | 第98-99页 |
| ·重组质粒联合X射线照射对MCF-7 细胞凋亡的影响 | 第99-100页 |
| ·重组质粒联合X射线照射对MCF-7 细胞周期的影响 | 第100-101页 |
| ·重组质粒联合X射线照射对ECV304 细胞作用的实验研究 | 第101-106页 |
| ·重组质粒联合X射线照射对ECV304 细胞的生长抑制作用 | 第101-104页 |
| ·重组质粒联合2.0 Gy X射线照射对ECV304 细胞生长抑制的时程效应 | 第101-102页 |
| ·重组质粒联合不同剂量X射线照射对ECV304 细胞生长抑制的剂量效应 | 第102-104页 |
| ·重组质粒联合X射线照射对ECV304 细胞凋亡的影响 | 第104-105页 |
| ·重组质粒联合X射线照射对ECV304 细胞周期的影响 | 第105-106页 |
| 第4章 讨论 | 第106-113页 |
| ·目的基因的获得和重组质粒的构建 | 第107-108页 |
| ·Egr-1 启动子的获得及其辐射敏感特性 | 第107页 |
| ·shTRAIL基因的获得 | 第107页 |
| ·shES基因的获得 | 第107-108页 |
| ·多基因共表达系统 | 第108页 |
| ·辐射诱导重组质粒的构建 | 第108页 |
| ·重组质粒pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES体外辐射诱导表达规律 | 第108-110页 |
| ·2.0 Gy X射线照射后重组质粒转染的MCF-7 细胞/上清中shTRAIL和shES mRNA和蛋白表达的时程变化 | 第109页 |
| ·不同剂量X射线照射后重组质粒转染的MCF-7 细胞/上清中shTRAIL和shES mRNA和蛋白表达的量效变化 | 第109-110页 |
| ·2.0 Gy X射线照射后重组质粒转染的ECV304 细胞/上清中shTRAIL和shES mRNA和蛋白表达的时程变化 | 第110页 |
| ·不同剂量X射线照射后重组质粒转染的ECV304 细胞/上清中shTRAIL和shES mRNA和蛋白表达的量效变化 | 第110页 |
| ·重组质粒联合X射线照射对MCF-7 和ECV304 细胞作用的实验研究 | 第110-113页 |
| ·重组质粒联合X射线照射对MCF-7和ECV304细胞的生长抑制作用 | 第110-111页 |
| ·重组质粒联合X射线照射对MCF-7 和ECV304 细胞凋亡的影响 | 第111-112页 |
| ·重组质粒联合X射线照射对MCF-7 和ECV304 细胞周期的影响 | 第112-113页 |
| 结论 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-124页 |
| 攻博期间发表的学术论文及其他成果 | 第124-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 中文摘要 | 第128-133页 |
| ABSTRACT | 第133-138页 |
