| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-35页 |
| ·鸡白介素18 的研究进展 | 第12-24页 |
| ·细胞因子简介 | 第12-13页 |
| ·Il-18 简介 | 第13-24页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第24-28页 |
| ·大肠杆菌表达系统简介 | 第24页 |
| ·大肠杆菌表达系统的组成 | 第24-26页 |
| ·pET 表达系统简介 | 第26页 |
| ·影响外源基因在大肠杆菌系统中表达的因素 | 第26-28页 |
| ·酵母表达系统简介 | 第28-35页 |
| ·宿主菌 | 第28页 |
| ·表达载体 | 第28-29页 |
| ·毕赤酵母表达系统的特点 | 第29-30页 |
| ·影响外源基因表达的因素 | 第30-31页 |
| ·宿主菌的甲醇利用表型(Mut+和Muts) | 第31页 |
| ·信号肽 | 第31页 |
| ·基因剂量 | 第31-32页 |
| ·环境因素 | 第32-35页 |
| 第二章 鸡白介素18 在大肠杆菌中的表达优化、纯化及体外活性检测 | 第35-49页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·菌株、载体及抗体 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| ·主要试剂的配置 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-41页 |
| ·ChIL-18 蛋白的诱导表达及SDS-PAGE | 第37-38页 |
| ·Western blotting 分析 | 第38页 |
| ·重组菌的遗传稳定性分析 | 第38-39页 |
| ·重组菌表达条件的优化 | 第39-40页 |
| ·重组ChIL-18 蛋白的纯化和定量 | 第40-41页 |
| ·重组ChIL-18 蛋白促进鸡外周血淋巴细胞增殖试验 | 第41页 |
| ·重组ChIL-18 蛋白促进鸡外周血淋巴细胞分泌γ干扰素试验 | 第41页 |
| ·试验结果与分析 | 第41-46页 |
| ·重组ChIL-18 蛋白的诱导表达和Western blotting 分析 | 第41-42页 |
| ·重组菌的遗传稳定性分析 | 第42页 |
| ·重组菌表达条件的优化 | 第42-44页 |
| ·重组ChIL-18 蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| ·重组ChIL-18 蛋白促进鸡外周血淋巴细胞转化试验 | 第45页 |
| ·分泌γ干扰素试验 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第三章 鸡IL-18 在酵母中的表达、纯化与体外活性检测 | 第49-72页 |
| ·材料 | 第49-52页 |
| ·载体、菌株及抗体 | 第49页 |
| ·主要酶和试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49-50页 |
| ·主要试剂的配置 | 第50-52页 |
| ·方法 | 第52-61页 |
| ·引物的设计与合成 | 第52页 |
| ·重组质粒pMD18-T-ChIL-18 的扩增与提取 | 第52页 |
| ·ChIL-18 基因序列的制备 | 第52页 |
| ·质粒pPICZαA 的大量提取及纯化 | 第52-53页 |
| ·ChIL-18PCR 扩增产物和质粒pPICZαA 的双酶切及酶切产物的纯化 | 第53页 |
| ·连接反应 | 第53页 |
| ·连接产物原核宿主菌JM109 感受态细胞的转化 | 第53-54页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第54-55页 |
| ·重组质粒pPICZαA-ChIL-18/pPICZαA 大量提取及线性化 | 第55页 |
| ·酵母菌X-33 感受态细胞的制备 | 第55页 |
| ·电脉冲转化毕赤酵母 | 第55-56页 |
| ·高抗性阳性转化子的筛选 | 第56页 |
| ·阳性转化子的筛选 | 第56-57页 |
| ·重组酵母菌的诱导表达 | 第57-58页 |
| ·表达产物的Western blotting 分析 | 第58页 |
| ·重组酵母菌的遗传稳定性试验 | 第58页 |
| ·重组菌表达条件的优化 | 第58-60页 |
| ·重组ChIL-18 蛋白的纯化和定量 | 第60-61页 |
| ·重组ChIL-18 蛋白促进鸡外周血淋巴细胞转化试验 | 第61页 |
| ·ChIL-18 蛋白促进鸡外周血淋巴细胞分泌γ干扰素试验 | 第61页 |
| ·结果 | 第61-68页 |
| ·ChIL-18 基因序列的制备 | 第61-62页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第62-63页 |
| ·电转化及重组酵母菌的鉴定 | 第63页 |
| ·重组菌的诱导表达及Western bloting 分析 | 第63-64页 |
| ·IL-18 的重组表达载体在酵母中的遗传稳定性试验 | 第64页 |
| ·重组毕赤酵母菌表达条件的优化 | 第64-67页 |
| ·重组鸡IL-18 的纯化 | 第67页 |
| ·重组ChIL-18 蛋白促进鸡外周血淋巴细胞转化试验 | 第67-68页 |
| ·分泌γ干扰素试验 | 第68页 |
| ·讨论 | 第68-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 第四章 重组鸡IL-18 对新城疫疫苗免疫增强作用的研究 | 第72-87页 |
| ·材料 | 第72-73页 |
| ·疫苗和毒株 | 第72页 |
| ·实验动物 | 第72页 |
| ·主要试剂 | 第72页 |
| ·主要仪器与设备 | 第72-73页 |
| ·主要试剂配制 | 第73页 |
| ·方法 | 第73-76页 |
| ·0.5%鸡红细胞悬液的制备 | 第73页 |
| ·抗原效价的检测 | 第73-74页 |
| ·血清抗体效价的检测 | 第74页 |
| ·试验鸡的分组及免疫 | 第74页 |
| ·血清中抗体效价的测定 | 第74页 |
| ·外周血T 淋巴细胞增值试验 | 第74-75页 |
| ·巨噬细胞分泌NO 的测定 | 第75页 |
| ·血清中干扰素含量的测定 | 第75页 |
| ·试验鸡免疫指数的测定 | 第75-76页 |
| ·攻毒试验 | 第76页 |
| ·数据分析 | 第76页 |
| ·试验结果与分析 | 第76-84页 |
| ·血清中抗体效价的测定结果 | 第76-77页 |
| ·外周血T 淋巴细胞增殖试验 | 第77-78页 |
| ·巨噬细胞分泌NO 的测定 | 第78-79页 |
| ·血清中γ干扰素含量的测定 | 第79-80页 |
| ·试验鸡免疫器官指数的测定 | 第80-83页 |
| ·攻毒试验 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-86页 |
| ·小结 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 个人简介 | 第98页 |
