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毛蚶(Scapharca Kagoshimensis)血红蛋白的类酚氧化酶活性及其cDNA克隆的研究

摘要第1-8页
ABSTRACT第8-18页
第一章 无脊椎动物的非特异性免疫综述第18-47页
 1 无脊椎动物的非特异性免疫系统概述第18-23页
   ·无脊椎动物对异己的识别机理第18-22页
   ·无脊椎动物非特异性免疫系统的研究意义第22-23页
 2 无脊椎动物血细胞的非特异性免疫功能及其研究进展第23-27页
   ·无脊椎动物血细胞的分类第23-25页
   ·甲壳动物血细胞的非特异性免疫功能及其研究进展第25页
   ·贝类动物血细胞的非特异性免疫功能及其研究进展第25-27页
 3 无脊椎动物体液免疫分子的非特异性免疫功能及其研究进展第27-33页
   ·无脊椎动物酚氧化酶的免疫功能及其研究进展第27-30页
     ·无脊椎动物酚氧化酶的免疫功能第27-28页
     ·无脊椎动物酚氧化酶的研究进展第28-30页
     ·无脊椎动物酚氧化酶的研究价值第30页
   ·无脊椎动物酚氧化酶原激活系统的研究进展第30-32页
     ·酚氧化酶原激活系统的组分及其功能第31-32页
     ·酚氧化酶原激活系统的研究价值第32页
   ·其它体液免疫因子的非特异性免疫功能及其研究进展第32-33页
 4 动物呼吸蛋白的研究进展第33-42页
   ·动物呼吸蛋白概述第33-34页
   ·血蓝蛋白分子结构及其生物学功能的研究进展第34-37页
     ·血蓝蛋白的分子结构第34-35页
     ·血蓝蛋白的生物学功能第35-37页
   ·血红蛋白分子结构及其生物学功能的研究进展第37-41页
     ·血红蛋白的分子结构第37-39页
     ·血红蛋白的生物学功能第39-41页
   ·蚯蚓血红蛋白的分子结构及其生物学功能的研究进展第41-42页
     ·蚯蚓血红蛋白的分子结构第41页
     ·蚯蚓血红蛋白的生物学功能第41-42页
 5 无脊椎动物常用的免疫促进剂综述第42-45页
   ·免疫促进剂的主要类别第42-43页
   ·免疫促进剂的生物学功能及其作用机理第43-44页
   ·免疫促进剂的研究价值及其应用前景第44-45页
 6 本文研究的目的与意义第45-47页
   ·本文研究的目的第45页
   ·研究意义第45-47页
第二章 毛蚶血红蛋白的分离纯化及其类酚氧化酶活性鉴定第47-71页
 1 实验用品第47-51页
   ·实验材料第47页
   ·试剂第47-48页
   ·仪器设备第48页
   ·几种常用溶液的配方第48-51页
 2 实验方法第51-55页
   ·毛蚶血红蛋白粗品的分离制备第51页
   ·毛蚶血红蛋白的柱层析纯化第51-53页
   ·SDS-PAGE 电泳第53页
   ·Native-PAGE 电泳第53-54页
   ·毛蚶血红蛋白类酚氧化酶活性的鉴定第54页
   ·Native-PAGE 电泳条带的质谱分析第54页
   ·酚氧化酶活性测定第54页
   ·蛋白质浓度测定第54-55页
   ·四种常用激活剂对血红蛋白转化为类酚氧化酶样酶的激活作用第55页
 3 实验结果第55-66页
   ·毛蚶血红蛋白的分离纯化第55-61页
   ·各种血红蛋白样品的SDS-PAGE 电泳第61-62页
   ·各种血红蛋白样品的Native-PAGE 电泳第62-63页
   ·各纯化步骤对毛蚶血红蛋白的纯化效率第63-64页
   ·毛蚶血红蛋白类酚氧化酶活性的鉴定第64-65页
   ·Native-PAGE 电泳条带的质谱分析第65页
   ·四种常用激活剂对血红蛋白转化为类酚氧化酶样酶的激活作用第65-66页
 4 讨论第66-70页
   ·毛蚶血红蛋白的分离纯化第66-67页
   ·毛蚶血红蛋白类酚氧化酶活性的鉴定第67-68页
   ·四种常用激活剂对血红蛋白转化为类酚氧化酶样酶的激活作用第68-70页
 5 结论第70-71页
第三章 毛蚶血红蛋白的生物化学性质与酶性质研究第71-84页
 1 实验用品第71-72页
   ·实验材料第71页
   ·试剂第71-72页
   ·仪器设备第72页
 2 实验方法第72-74页
   ·血红蛋白的酚氧化酶活性测定第72-73页
   ·不同温度对毛蚶血红蛋白类酚氧化酶活性的影响第73页
   ·不同pH 对毛蚶血红蛋白类酚氧化酶活性的影响第73页
   ·毛蚶血红蛋白类酚氧化酶活性的酶动力学曲线测定第73页
   ·不同氧化酶抑制剂对毛蚶血红蛋白类酚氧化酶活性的影响第73-74页
   ·金属螯合剂和金属离子对毛蚶血红蛋白类酚氧化酶活性的影响第74页
   ·铁离子对EDTA 预处理毛蚶血红蛋白的类酚氧化酶活性的回复作用第74页
 3 实验结果第74-80页
   ·不同温度对毛蚶血红蛋白类酚氧化酶活性的影响第74-76页
   ·不同pH 对毛蚶血红蛋白类酚氧化酶活性的影响第76页
   ·毛蚶血红蛋白类酚氧化酶活性的酶动力学曲线测定第76-77页
   ·不同氧化酶抑制剂对毛蚶血红蛋白类酚氧化酶活性的影响第77-78页
   ·金属螯合剂和金属离子对毛蚶血红蛋白类酚氧化酶活性的影响第78-79页
   ·铁离子对EDTA 预处理毛蚶血红蛋白的类酚氧化酶活性回复作用第79-80页
 4 讨论第80-82页
 5 结论第82-84页
第四章 免疫促进剂对毛蚶血红蛋白和血细胞的影响作用研究第84-93页
 1 实验用品第84-85页
   ·实验材料第84-85页
   ·试剂第85页
   ·仪器设备第85页
 2 实验方法第85-87页
   ·灭活哈维氏弧菌、灭活鳗弧菌悬液的制备第85-86页
   ·四种免疫促进剂处理毛蚶的方法第86页
   ·免疫促进剂处理后毛蚶血红蛋白样品的制备第86页
   ·毛蚶血细胞的获得第86-87页
 3 实验结果第87-89页
   ·四种免疫促进剂对毛蚶血红蛋白产量的影响第87页
   ·四种免疫促进剂对毛蚶血红蛋白类酚氧化酶活性的影响第87-88页
   ·四种免疫促进剂对毛蚶血细胞数量的影响第88-89页
 4 讨论第89-91页
 5 结论第91-93页
第五章 细菌感染对毛蚶血红蛋白和血细胞影响作用的研究第93-100页
 1 实验用品第93-94页
   ·实验材料第93-94页
   ·试剂第94页
   ·仪器设备第94页
 2 实验方法第94-95页
   ·哈维氏弧菌、鳗弧菌悬液的制备第94-95页
   ·哈维氏弧菌、鳗弧菌处理毛蚶的方法第95页
   ·处理后毛蚶血红蛋白样品的制备第95页
   ·毛蚶血细胞的获得第95页
 3 实验结果第95-97页
   ·哈维氏弧菌和鳗弧菌对毛蚶血红蛋白产量及其类酚氧化酶活性的影响第95-96页
   ·哈维氏弧菌和鳗弧菌对毛蚶血细胞数量的影响第96-97页
 4 讨论第97-99页
 5 结论第99-100页
第六章 毛蚶血红蛋白基因的cDNA 克隆第100-129页
 1 实验用品第100-103页
   ·实验材料第100-101页
   ·主要试剂盒、载体和工具酶第101页
   ·仪器设备第101-102页
   ·主要试剂配制第102页
   ·PCR 引物第102-103页
 2 实验方法第103-113页
   ·毛蚶血细胞的制备和总RNA 的提取第103-104页
   ·cDNA 第一条链的合成第104-105页
   ·cDNA 保守序列的PCR 扩增第105页
   ·RACE 扩增第105-108页
   ·cDNA 全长的PCR 扩增第108页
   ·基因组DNA 的提取第108-109页
   ·DNA 全长的 PCR 扩增第109-110页
   ·凝胶电泳中 DNA 片段的回收第110页
   ·DNA 片段与克隆载体 pMD18-T 的连接第110-111页
   ·大肠杆菌感受态细胞的制备第111页
   ·质粒向大肠杆菌转化(热激法)第111-112页
   ·PCR 快速鉴定阳性克隆第112页
   ·核酸序列测定第112页
   ·序列分析第112-113页
 3 实验结果第113-126页
   ·总RNA 的获得与鉴定第113-114页
   ·保守片段 cDNA 结果第114-115页
   ·3’RACE 扩增第115-116页
   ·5’RACE 扩增第116页
   ·毛蚶血红蛋白全长 cDNA 序列及分析第116-119页
   ·毛蚶血红蛋白的推测氨基酸序列第119页
   ·毛蚶血红蛋白的同源性分析第119-121页
   ·毛蚶血红蛋白的分子系统进化分析第121-123页
   ·毛蚶血红蛋白与酚氧化酶的同源性分析第123-125页
   ·毛蚶血红蛋白与血蓝蛋白的同源性分析第125-126页
 4 讨论第126-127页
 5 结论第127-129页
全文总结第129-132页
参考文献第132-141页
本文所用缩写词第141-143页
个人简历第143-144页
在学期间发表的学术论文及专利第144-145页
致谢第145页

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