| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-21页 |
| 1.1 犬细小病毒病和犬细小病毒概述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 犬细小病毒病 | 第11页 |
| 1.1.2 犬细小病毒 | 第11-14页 |
| 1.2 犬细小病毒病的免疫防治 | 第14-16页 |
| 1.2.1 犬细小病毒病疫苗及免疫程序 | 第14-16页 |
| 1.2.2 犬细小病毒病疫苗免疫抗体的检测方法 | 第16页 |
| 1.3 凝集试验 | 第16-18页 |
| 1.3.1 直接凝集试验 | 第16-17页 |
| 1.3.2 间接凝集试验 | 第17-18页 |
| 1.3.3 其他凝集试验 | 第18页 |
| 1.4 纳米微球及其在疾病检测领域的应用 | 第18-19页 |
| 1.4.1 纳米微球的分类 | 第18-19页 |
| 1.4.2 纳米微球在疾病检测领域的应用 | 第19页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验动物、细胞系及质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 病毒分离样品、阳性血清、CPV疫苗株 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-31页 |
| 2.2.1 引物设计及合成 | 第22-23页 |
| 2.2.2 CPV分离鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.3 分离病毒VP2基因分析 | 第24-26页 |
| 2.2.4 CPVVP2重组基因的克隆与表达 | 第26-29页 |
| 2.2.5 CPV抗体检测间接凝集试验的建立 | 第29-31页 |
| 3 结果 | 第31-51页 |
| 3.1 CPV分离鉴定 | 第31-34页 |
| 3.1.1 病毒分离 | 第31-32页 |
| 3.1.2 PCR鉴定 | 第32页 |
| 3.1.3 血凝效价 | 第32页 |
| 3.1.4 电镜观察 | 第32-33页 |
| 3.1.5 间接免疫荧光鉴定 | 第33-34页 |
| 3.2 CPVVP2基因的序列分析 | 第34-39页 |
| 3.2.1 CPVVP2基因克隆鉴定 | 第34页 |
| 3.2.2 CPV分离株VP2基因序列分析 | 第34-37页 |
| 3.2.3 CPV分离株亚型分析 | 第37-38页 |
| 3.2.4 抗原表位差异性分析 | 第38-39页 |
| 3.2.5 TCID50测定 | 第39页 |
| 3.2.6 CPV分离株中和效价检测 | 第39页 |
| 3.3 重组CPVVP2蛋白的原核表达 | 第39-46页 |
| 3.3.1 重组CPVVP2基因的克隆及鉴定 | 第39-41页 |
| 3.3.2 重组CPVVP2质粒的构建及鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3.3 重组CPVVP2蛋白的表达 | 第42-43页 |
| 3.3.4 重组蛋白的纯化及鉴定 | 第43-46页 |
| 3.4 CPV抗体检测间接凝集试验的建立 | 第46-51页 |
| 3.4.1 聚苯乙烯微球致敏条件的优化 | 第46-47页 |
| 3.4.2 间接凝集试验阳性判定标准的确立 | 第47-48页 |
| 3.4.3 CPV抗体间接凝集试验的特异性 | 第48页 |
| 3.4.5 CPV抗体检测间接凝集试验的重复性和稳定性试验 | 第48-50页 |
| 3.4.6 CPV疫苗免疫犬血清抗体检测 | 第50页 |
| 3.4.7 间接凝集试验的初步应用 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| 4.1 CPV的分离鉴定 | 第51-52页 |
| 4.2 CPVVP2重组蛋白的表达及选择 | 第52页 |
| 4.3 纳米微球致敏条件优化 | 第52-53页 |
| 4.4 间接凝集试验的判定标准的确定 | 第53-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录 | 第62-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第65页 |