| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-10页 |
| 符号说明 | 第10-13页 |
| 第一章 IL-22 介导的细胞信号通路研究进展 | 第13-32页 |
| 1. IL-22 的来源、编码基因及分子结构 | 第13-15页 |
| 2. IL-22 受体复合物及其介导的信号传递 | 第15-17页 |
| 3. IL-22 可溶性受体 | 第17-18页 |
| 4. IL-22 的生物学功能 | 第18-21页 |
| 5. IL-22 与肿瘤细胞 | 第21-22页 |
| 6. Shp2 参与 MAPK 通路活化的机制 | 第22-26页 |
| 参考文献 | 第26-32页 |
| 第二章 Shp2 调控 IL-22 活化肿瘤细胞 MAPK 通路的机制 | 第32-63页 |
| 前言 | 第32页 |
| 1 材料与方法 | 第32-47页 |
| ·材料 | 第32-36页 |
| ·细菌、质粒和细胞 | 第32页 |
| ·主要试剂及配方 | 第32-34页 |
| ·溶液配制 | 第34-35页 |
| ·主要实验仪器 | 第35页 |
| ·抗体 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-47页 |
| ·DNA 片段亚克隆及定点诱变 | 第36-39页 |
| ·pcDNA3.1-IL22R1-flag 的构建 | 第36-37页 |
| ·IL-22R1 片段的扩增 | 第36-37页 |
| ·pcDNA3.1-IL-22R1-flag 的克隆及鉴定 | 第37页 |
| ·pcDNA3.1-IL-22R1-Y251F-flag 的构建 | 第37-38页 |
| ·IL-22R1-Y251F 的上游片段的 PCR 扩增及纯化回收 | 第37-38页 |
| ·IL-22R1-Y251F 的下游片段的 PCR 扩增及纯化回收 | 第38页 |
| ·IL-22R1-Y251F-flag 全长片段的扩增及纯化回收 | 第38页 |
| ·pcDNA3.1-IL-22R1-Y251F-flag 的克隆及鉴定 | 第38页 |
| ·pcDNA3.1-IL-22R1-Y301F-flag 的构建 | 第38页 |
| ·pcDNA3.1-IL-22R1-FF-flag 的构建 | 第38-39页 |
| ·pcDNA5/FRT-IL22R2-Flag,pcDNA5/FRT-IL22R1-FF-Flag 质粒的构建 | 第39页 |
| ·细胞培养及计数 | 第39页 |
| ·Western blot 检测相关蛋白 | 第39-42页 |
| ·Western blot 样品制备 | 第39页 |
| ·免疫共沉淀样品制备 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第40页 |
| ·加样 | 第40页 |
| ·电泳 | 第40页 |
| ·电转移 | 第40-41页 |
| ·抗原抗体反应 | 第41-42页 |
| ·封闭 | 第41页 |
| ·一抗作用 | 第41-42页 |
| ·二抗作用 | 第42页 |
| ·显影 | 第42页 |
| ·转染 | 第42-43页 |
| ·Flp-InTM-293 稳定表达 IL-22R-Flag 及 IL-22R-FF-Flag 细胞系的构建 | 第43-45页 |
| ·细胞株构建原理 | 第43-45页 |
| ·潮霉素 B 筛选浓度的确定 | 第45页 |
| ·重组质粒转染细胞 | 第45页 |
| ·亚克隆的挑选与鉴定 | 第45页 |
| ·WST 法检测 IL-22 对肿瘤细胞增殖的促进作用 | 第45-46页 |
| ·FACS 检测细胞表面 IL22R1-Flag、IL22R1-FF-Flag 的表达 | 第46-47页 |
| 2 实验结果 | 第47-59页 |
| ·IL-22诱导Src, Erk1/2及STAT3的活化 | 第47-48页 |
| ·IL-22 诱导 Shp2 与 IL-22R1 的结合 | 第48页 |
| ·HEK293 中,内外源 Shp2 与瞬时表达的 IL-22R1 结合 | 第48-50页 |
| ·IL-22R1 的 Tyr-251 和 Tyr-301 位点对其与 Shp2 结合是必需的 | 第50-51页 |
| ·IL-22R1 的 Tyr-251 和 Tyr-301 位点对 IL-22 刺激引起 Erk2 活化是必需的 | 第51-52页 |
| ·IL-22R1 的 Tyr-251 和 Tyr-301 位点对 IL-22 刺激引起 Stat3 活化是必需的 | 第52-53页 |
| ·Shp2 酪氨酸磷酸酶活性对于 IL-22 诱导的 Erk2 活化是必需的 | 第53-55页 |
| ·Shp2 的酪氨酸磷酸酶活性对于 IL-22 诱导的细胞增殖是必需的 | 第55页 |
| ·Shp2 与双突变型 IL-22R1 的结合对 IL-22 刺激引起 STAT3 及 MAPK活化过程产生影响 | 第55-57页 |
| ·Shp2 与 IL-22R1 的结合对 IL-22 诱导的细胞增殖具有显著影响 | 第57-59页 |
| 3 讨论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
