| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第8-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-23页 |
| 1 烯醇化酶 | 第13-16页 |
| ·烯醇化酶概述 | 第13-14页 |
| ·烯醇化酶的同工酶 | 第14页 |
| ·烯醇化酶的功能 | 第14-15页 |
| ·鸡毒支原体中的烯醇化酶 | 第15-16页 |
| 2 神经氨酸酶 | 第16-18页 |
| ·神经氨酸酶概述 | 第16-17页 |
| ·AIV 中的NA | 第17页 |
| ·NDV 中的NA | 第17页 |
| ·支原体中的NA | 第17-18页 |
| 3 LicA | 第18页 |
| 4 支原体表达的蛋白激酶 | 第18-21页 |
| 参考文献 | 第21-23页 |
| 第二部分 鸡毒支原体烯醇化酶生物学活性研究 | 第23-60页 |
| 第一章 鸡毒支原体烯醇化酶的克隆、表达及抗体的制备 | 第23-34页 |
| 1 材料和方法 | 第23-27页 |
| ·毒株、菌株、细胞、实验动物 | 第23页 |
| ·载体与主要试剂 | 第23-24页 |
| ·支原体培养基的配制 | 第24页 |
| ·MG 基因组的提取 | 第24页 |
| ·烯醇化酶的重叠PCR 扩增 | 第24-25页 |
| ·原核表达载体的克隆及原核表达 | 第25-26页 |
| ·可溶性分析 | 第26页 |
| ·多抗制备 | 第26页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第26页 |
| ·MG 全菌裂解产物ELISA 检测 | 第26页 |
| ·Western-blot 检测 | 第26-27页 |
| 2 结果 | 第27-31页 |
| ·重叠PCR 扩增烯醇化酶基因 | 第27-28页 |
| ·原核表达 | 第28页 |
| ·可溶性分析 | 第28页 |
| ·MG 全菌裂解产物ELISA 检测 | 第28-29页 |
| ·多抗血清的Western-blot 检测 | 第29-30页 |
| ·制备6 株单克隆抗体 | 第30页 |
| ·单抗的Western-blotting 检测 | 第30-31页 |
| 3 讨论 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-34页 |
| 第二章 鸡毒支原体烯醇化酶的膜定位特性研究 | 第34-39页 |
| 1 材料和方法 | 第34-35页 |
| ·毒株 | 第34页 |
| ·抗体与试剂 | 第34页 |
| ·MG 膜蛋白提取 | 第34-35页 |
| ·Western-blot 试验 | 第35页 |
| ·悬浮法免疫荧光试验 | 第35页 |
| ·胶体金免疫电镜检测 | 第35页 |
| 2 结果 | 第35-37页 |
| ·膜蛋白的提取 | 第35页 |
| ·Western-blot 检测 | 第35页 |
| ·悬浮法免疫荧光检测 | 第35-37页 |
| ·胶体金免疫电镜检测 | 第37页 |
| 3 讨论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-39页 |
| 第三章 鸡毒支原体烯醇化酶的酶活性测定 | 第39-49页 |
| 1 材料和方法 | 第39-41页 |
| ·毒株 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·NADH 间接检测法 | 第39-40页 |
| ·PEP 直接检测酶活性 | 第40-41页 |
| 2 结果 | 第41-46页 |
| ·重组鸡毒支原体烯醇化酶（rMGEno）比活性测定 | 第41-42页 |
| ·PEP OD 值与浓度的标准曲线 | 第42页 |
| ·烯醇化酶单一酶活性检测 | 第42-44页 |
| ·pH 值对rMGEno 酶活性的影响 | 第44页 |
| ·金属阳离子对酶促反应的影响 | 第44页 |
| ·温度对rMGEno 酶活性的影响 | 第44-46页 |
| 3 讨论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-49页 |
| 第四章 鸡毒支原体烯醇化酶黏附特性及细胞入侵阻断试验 | 第49-60页 |
| 1 材料和方法 | 第49-53页 |
| ·毒株、细胞 | 第49-50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·Plasminogen Binding 试验 | 第50页 |
| ·Fibronectin Binding 试验 | 第50页 |
| ·rMGEno 与Plg 的结合反应 | 第50页 |
| ·Ligand Blot 试验 | 第50-51页 |
| ·鸡毒支原体细胞黏附试验和入侵试验 | 第51-52页 |
| ·庆大霉素入侵试验及入侵阻断试验 | 第52-53页 |
| ·统计分析 | 第53页 |
| 2 结果 | 第53-57页 |
| ·ChPlg 和HuFln 的结合试验 | 第53页 |
| ·配体结合试验 | 第53-55页 |
| ·tPA 激活对MG 黏附的影响 | 第55页 |
| ·庆大霉素抑制浓度的确定 | 第55页 |
| ·Eno 抗体对MG 黏附的影响 | 第55-56页 |
| ·Eno 抗体对MG 入侵细胞的影响 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-60页 |
| 第三部分 鸡毒支原体神经氨酸酶生物学活性研究 | 第60-82页 |
| 第五章 鸡毒支原体的神经氨酸酶活性测定及生物被膜检测 | 第60-69页 |
| 1 材料和方法 | 第60-62页 |
| ·毒株、菌株 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60-61页 |
| ·支原体菌体总蛋白的NA 活性检测 | 第61页 |
| ·支原体生物被膜的检测 | 第61-62页 |
| 2 结果 | 第62-66页 |
| ·不同病原体中NA 活性位点的比对 | 第62页 |
| ·支原体菌体总蛋白的NA 活性检测 | 第62-64页 |
| ·MG 生物被膜的检测 | 第64-66页 |
| 3 讨论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-69页 |
| 第六章 鸡毒支原体神经氨酸酶的多点突变技术 | 第69-82页 |
| 1 材料和方法 | 第69-75页 |
| ·毒株、菌株 | 第69页 |
| ·载体及主要试剂 | 第69页 |
| ·NA C 末端的原核表达及抗原性鉴定 | 第69-71页 |
| ·NA 多点突变引物的设计 | 第71-73页 |
| ·重叠PCR 扩增NA 多点突变体 | 第73-75页 |
| ·NA 全长的构建 | 第75页 |
| 2 结果 | 第75-79页 |
| ·NA C 末端PCR 扩增 | 第75页 |
| ·NA C 末端的原核表达 | 第75页 |
| ·NA C 末端的可溶性分析 | 第75-76页 |
| ·多抗血清的Western-blot 检测 | 第76-77页 |
| ·NA N 端的多点突变 | 第77-78页 |
| ·NA C 端的多点突变 | 第78-79页 |
| ·NA 全长的构建 | 第79页 |
| 3 讨论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-82页 |
| 全文总结 | 第82-83页 |
| 附录：攻读硕士学位期间发表的论文 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
