| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-39页 |
| 1 植物与微生物共生系统 | 第14-18页 |
| ·植物与微生物共生的意义和种类 | 第14页 |
| ·根瘤共生固氮 | 第14-16页 |
| ·生物固氮的意义 | 第14-15页 |
| ·生物固氮的种类 | 第15页 |
| ·根瘤共生 | 第15-16页 |
| ·菌根共生系统 | 第16-18页 |
| ·外生菌根 | 第17页 |
| ·内生菌根 | 第17-18页 |
| 2 豆科植物与根瘤菌根瘤共生固氮系统 | 第18-36页 |
| ·豆科植物概况 | 第18-19页 |
| ·根瘤的形成过程 | 第19-22页 |
| ·根瘤菌与豆科植物间信号分子识别 | 第19-21页 |
| ·根瘤菌侵染和根瘤器官发生 | 第21-22页 |
| ·根瘤的类型-定型瘤和不定型瘤 | 第22-24页 |
| ·结瘤早期信号传导 | 第24-31页 |
| ·结瘤因子感知 | 第25-26页 |
| ·结瘤因子信号转导途径中的功能基因 | 第26-30页 |
| ·结瘤因子信号转导途径模型 | 第30-31页 |
| ·自发结瘤 | 第31-32页 |
| ·结瘤调控系统 | 第32-34页 |
| ·长距离信号交流 | 第32-34页 |
| ·短距离信号交流 | 第34页 |
| ·植物激素在结瘤中的调控作用 | 第34-36页 |
| ·行使正调节作用的激素 | 第34-35页 |
| ·行使负调节作用的激素 | 第35-36页 |
| 3 共生系统演化 | 第36-39页 |
| ·共同共生基因 | 第37页 |
| ·菌根因子及受体 | 第37-39页 |
| 第二章 百脉根中与CCaMK相互作用蛋白的研究 | 第39-89页 |
| 1 前言 | 第39-43页 |
| ·植物中钙离子调节的蛋白激酶 | 第39-40页 |
| ·CCaMK的基因和蛋白特性 | 第40-41页 |
| ·CCaMK与共生 | 第41-43页 |
| 2 材料与方法 | 第43-67页 |
| ·质粒和菌株 | 第43-45页 |
| ·植物材料 | 第45页 |
| ·酵母双杂交筛选CCaMK相互作用蛋白 | 第45-54页 |
| ·酵母培养基 | 第46页 |
| ·酵母双杂交相关试剂 | 第46-47页 |
| ·酵母转化 | 第47-49页 |
| ·诱饵载体的构建 | 第49-50页 |
| ·酵母文库的筛选与阳性克隆的鉴定 | 第50-54页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性检测 | 第54页 |
| ·体外蛋白Pull-down分析蛋白质之间的相互作用 | 第54-60页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试剂 | 第54-56页 |
| ·蛋白质纯化试剂 | 第56页 |
| ·Western Blot试剂 | 第56页 |
| ·目标蛋白诱导表达 | 第56-57页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第57-59页 |
| ·抗体制备 | 第59页 |
| ·Western Blotting | 第59-60页 |
| ·双分子荧光互补(BiFC)分析 | 第60-61页 |
| ·BiFC载体构建 | 第60页 |
| ·烟草叶片的瞬间表达分析 | 第60-61页 |
| ·体外蛋白磷酸化分析 | 第61-62页 |
| ·蛋白质磷酸化试剂 | 第61页 |
| ·钙调素蛋白(CaM)的表达和纯化 | 第61-62页 |
| ·蛋白激酶的自磷酸化和底物磷酸化检测 | 第62页 |
| ·表达分析 | 第62-64页 |
| ·总RNA的抽提 | 第62-63页 |
| ·半定量RT-PCR分析 | 第63页 |
| ·Real-Time PCR分析 | 第63-64页 |
| ·亚细胞定位分析 | 第64-65页 |
| ·CIP73在洋葱表皮细胞中的定位 | 第64-65页 |
| ·CIP73在百脉根毛根细胞中的定位 | 第65页 |
| ·RNAi载体的构建 | 第65页 |
| ·毛根转化和鉴定 | 第65-67页 |
| ·常用试剂和培养基 | 第65-66页 |
| ·百脉根毛根转化 | 第66-67页 |
| ·根瘤菌接种 | 第67页 |
| 3 结果与分析 | 第67-85页 |
| ·酵母双杂交筛选与CCaMK相互作用的蛋白 | 第67-68页 |
| ·CIP73蛋白的结构特性 | 第68-71页 |
| ·CCaMK与CIP73之间的相互作用 | 第71-74页 |
| ·CCaMK与CIP73相互作用区段的鉴定 | 第71页 |
| ·体外蛋白Pull-down验证CCaMK与CIP73之间的相互作用 | 第71-73页 |
| ·双分子荧光互补验证CCaMK与CIP73之间的相互作用 | 第73-74页 |
| ·CIP73蛋白在酵母细胞中有弱的转录激活作用 | 第74-75页 |
| ·CIP73蛋白在酵母细胞中能形成同源二聚体 | 第75页 |
| ·CIP73基因在百脉根中的表达 | 第75-77页 |
| ·CIP73蛋白的亚细胞定位 | 第77-78页 |
| ·CIP73蛋白是CCaMK的磷酸化底物 | 第78-80页 |
| ·CIP73在根瘤共生中生物学功能的初步探索 | 第80-83页 |
| ·结瘤在CIP73的RNAi根中受到抑制 | 第80-81页 |
| ·CIP73 RNAi根瘤菌侵染表型 | 第81-83页 |
| ·CIP73 RNAi菌根真菌侵染表型 | 第83页 |
| ·酵母双杂交筛选与CIP73相互作用的蛋白 | 第83-85页 |
| 4. 讨论 | 第85-89页 |
| ·CCaMK、CYCLOPS和CIP73三者之间的关系 | 第85-86页 |
| ·CCaMK和CIP73相互作用的方式 | 第86页 |
| ·CIP73的表达和亚细胞定位 | 第86-87页 |
| ·CIP73可能的生化和生物学功能 | 第87-89页 |
| 第三章 CCaMK在水稻中共生效应的研究 | 第89-107页 |
| 1 前言 | 第89-93页 |
| ·研究意义 | 第89页 |
| ·国内外研究现状及分析 | 第89-93页 |
| 2 材料与方法 | 第93-102页 |
| ·植物材料 | 第93页 |
| ·表达载体的构建 | 第93-94页 |
| ·超表达载体的构建 | 第93-94页 |
| ·自身启动子表达载体的构建 | 第94页 |
| ·水稻愈伤组织根癌农杆菌介导的转化 | 第94-101页 |
| ·农杆菌菌株 | 第94页 |
| ·农杆菌侵染常用物品 | 第94-95页 |
| ·常用试剂和培养基 | 第95-97页 |
| ·转化步骤 | 第97-101页 |
| ·基因组总DNA抽提 | 第101-102页 |
| 3 结果与分析 | 第102-106页 |
| ·水稻CCaMK基因的克隆 | 第102页 |
| ·水稻CCaMK的T263A点突变的构建 | 第102-103页 |
| ·阳性转基因水稻的鉴定 | 第103-105页 |
| ·PCR扩增GUS基因鉴定阳性转基因植株 | 第103-105页 |
| ·GUS染色鉴定阳性转基因植株 | 第105页 |
| ·转基因植株表型初步分析 | 第105-106页 |
| 4 讨论 | 第106-107页 |
| 第四章 百脉根中与NSP2相互作用蛋白IPN2的研究 | 第107-129页 |
| 1 前言 | 第107-108页 |
| 2 材料与方法 | 第108-110页 |
| ·酵母单杂交实验 | 第108页 |
| ·DNA和蛋白质体外相互作用 | 第108-109页 |
| ·探针的同位素标记 | 第108页 |
| ·凝胶阻滞实验(EMSA) | 第108-109页 |
| ·IPN2的启动子与GUS融合载体的构建 | 第109页 |
| ·IPN2的超表达和RNAi载体的构建 | 第109页 |
| ·序列比对和进化树分析 | 第109-110页 |
| 3 结果与分析 | 第110-122页 |
| ·IPN2蛋白和基因的结构特性 | 第110-113页 |
| ·IPN2和NSP2相互作用结构域的鉴定 | 第113-115页 |
| ·IPN2和NSP2体外蛋白之间相互作用 | 第115-116页 |
| ·IPN2和NSP2在植物细胞核中相互作用 | 第116页 |
| ·IPN2结合DNA的能力 | 第116-118页 |
| ·IPN2的转录激活能力 | 第118页 |
| ·IPN2的表达分析 | 第118-119页 |
| ·IPN2的亚细胞定位 | 第119页 |
| ·IPN2的启动子特性 | 第119-121页 |
| ·IPN2生物学功能的初步研究 | 第121-122页 |
| 4 讨论 | 第122-129页 |
| ·转录因子IPN2、NSP2和NSP1相互作用 | 第122-124页 |
| ·IPN2和MYB家族转录因子 | 第124-126页 |
| ·细胞分裂素、维管发育和瘤器官形成 | 第126-127页 |
| ·IPN2、韧皮部和结瘤自主调控 | 第127-129页 |
| 第五章 全文总结 | 第129-130页 |
| 参考文献 | 第130-143页 |
| 附录一:本研究所用引物 | 第143-146页 |
| 附录二:10X Dropout(DO)supplements | 第146-147页 |
| 附录三:CIP73全长cDNA序列 | 第147-149页 |
| 附录四:已发表的论文 | 第149-150页 |
| 致谢 | 第150页 |
